Nature.com گهمڻ لاءِ توهان جي مهرباني.برائوزر جو نسخو توهان استعمال ڪري رهيا آهيو محدود CSS سپورٽ آهي.بهترين تجربي لاءِ، اسان سفارش ڪريون ٿا ته توهان هڪ اپڊيٽ ٿيل برائوزر استعمال ڪريو (يا انٽرنيٽ ايڪسپلورر ۾ مطابقت واري موڊ کي بند ڪريو).ساڳئي وقت ۾، مسلسل حمايت کي يقيني بڻائڻ لاء، اسان سائيٽ کي بغير اسٽائل ۽ جاوا اسڪرپٽ پيش ڪنداسين.
Toxoplasma gondii هڪ intracellular protozoan parasite آهي جيڪو متاثر ٿيل ميزبان جي مائڪرو ماحوليات کي تبديل ڪري ٿو ۽ اهو معلوم ٿئي ٿو ته اهو دماغ جي ٽومر جي واڌ جي واقعن سان لاڳاپيل آهي.هن مطالعي ۾، اسان اهو سمجهون ٿا ته Exosomal miRNA-21 Toxoplasma انفيڪشن مان دماغ جي تومور جي واڌ کي وڌايو.Toxoplasma-infected BV2 microglia مان Exosomes جي خصوصيت ڪئي وئي ۽ U87 glioma سيلز جي اندروني ٿيڻ جي تصديق ڪئي وئي.Exosomal microRNA ايڪسپريس پروفائلز جو تجزيو ڪيو ويو microRNA ۽ microRNA-21A-5p جي صفن جو استعمال ڪندي Toxoplasma gondii ۽ tumor sorting سان لاڳاپيل.اسان U87 گليوما سيلز ۾ ٽيمر سان لاڳاپيل جين جي ايم آر اين اي جي سطحن جي پڻ تحقيق ڪئي exosomes ۾ miR-21 جي سطح کي تبديل ڪندي ۽ انساني U87 glioma سيل جي واڌ تي exosomes جو اثر.Toxoplasma gondii سان متاثر ٿيل U87 glioma سيلز جي exosomes ۾، microRNA-21 جو اظهار وڌايو ويندو آهي ۽ antitumor genes (FoxO1، PTEN، ۽ PDCD4) جي سرگرمي گھٽجي ويندي آهي.Toxoplasma سان متاثر ٿيل BV2 نڪتل exosomes U87 glioma سيلز جي واڌ کي وڌائي ٿو.Exosomes مائوس جي ٽومر ماڊل ۾ U87 سيلز جي واڌ کي وڌايو.اسان تجويز ڪريون ٿا ته Toxoplasma-infected BV2 microglia ۾ exosomal miR-21 وڌائي سگھي ٿي U87 glioma سيلز ۾ اينٽيٽيمر جينز کي گھٽائڻ سان سيل جي ترقي جي فروغ جي طور تي اهم ڪردار ادا ڪري سگھي ٿي.
اهو اندازو آهي ته 2018 ۾ سڄي دنيا ۾ 18.1 ملين کان وڌيڪ ترقي يافته ڪينسر جي ڪيسن جي تشخيص ڪئي وئي، تقريبن 297,000 مرڪزي اعصاب سسٽم جي ٽيومر جي هر سال تشخيص ڪئي وئي (سڀني ٽومر جو 1.6٪).پوئين تحقيق ڏيکاريو ويو آهي ته انساني دماغ جي ٽامي جي ترقي لاء خطري جا عنصر شامل آهن مختلف ڪيميائي شيون، خاندان جي تاريخ، ۽ سر جي علاج ۽ تشخيصي سامان مان آئنائيز تابڪاري.بهرحال، انهن خرابين جو صحيح سبب نامعلوم ناهي.سڄي دنيا ۾ لڳ ڀڳ 20 سيڪڙو ڪينسر متاثر ٿيندڙ ايجنٽن جي ڪري ٿين ٿا، جن ۾ وائرس، بيڪٽيريا ۽ پرجيز شامل آهن3,4.متاثر ٿيندڙ پيٿوجنز ميزبان سيل جي جينياتي ميڪانيزم کي خراب ڪن ٿا، جهڙوڪ ڊي اين اي جي مرمت ۽ سيل جي چڪر، ۽ دائمي سوزش ۽ مدافعتي نظام کي نقصان پهچائي سگھي ٿو 5.
انسانن جي ڪينسر سان لاڳاپيل متاثر ٿيندڙ ايجنٽ سڀ کان وڌيڪ عام وائرل پيٿوجنز آهن، جن ۾ انساني پيپيلوما وائرس ۽ هيپاٽائيٽس بي ۽ سي وائرس شامل آهن.پرازي پڻ انساني ڪينسر جي ترقي ۾ هڪ امڪاني ڪردار ادا ڪري سگهن ٿا.پرازي جا ڪيترائي قسم، يعني Schistosoma، Opishorchis viverrini، O. felineus، Clonorchis sinensis ۽ Hymenolepis nana، انساني ڪينسر جي مختلف قسمن ۾ پکڙيل آهن 6,7,8.
Toxoplasma gondii هڪ intracellular protozoan آهي جيڪو متاثر ٿيل ميزبان سيلز جي مائڪرو ماحوليات کي منظم ڪري ٿو.هي پرازيت دنيا جي تقريبن 30 سيڪڙو آبادي کي متاثر ڪرڻ جو اندازو لڳايو ويو آهي، سڄي آبادي کي خطري ۾ وجهي ٿو 9,10.Toxoplasma gondii اهم عضون کي متاثر ڪري سگھي ٿو، بشمول مرڪزي نروس سسٽم (CNS)، ۽ سنگين بيمارين جو سبب بڻجي سگھي ٿو جهڙوڪ موت جي گردن جي سوزش ۽ encephalitis، خاص طور تي مدافعتي نظام 9 ۾.جڏهن ته، Toxoplasma gondii پڻ متاثر ٿيل ميزبان جي ماحول کي تبديل ڪري سگهي ٿو سيل جي واڌ ۽ مدافعتي ردعمل کي تبديل ڪندي مدافعتي ماڻهن ۾، هڪ غير علامتي دائمي انفيڪشن 9,11 جي سار سنڀال جي ڪري.دلچسپ ڳالهه اها آهي ته، T. gondii جي اڳڀرائي ۽ دماغ جي ٽومر جي واقعن جي وچ ۾ لاڳاپو ڏنو ويو آهي، ڪجهه رپورٽون پيش ڪن ٿيون ته وييو ميزبان ماحولياتي تبديلين جي ڪري دائمي T. gondii انفيڪشن جي ڪري ٽمور مائڪرو ماحوليات سان مشابهت رکي ٿي.
Exosomes کي انٽرسيلولر ڪميونيڪيٽرس طور سڃاتو وڃي ٿو جيڪي حياتياتي مواد پهچائين ٿا، بشمول پروٽين ۽ نيوڪلڪ ايسڊ، پاڙيسري سيلن مان 16,17.Exosomes طومار سان لاڳاپيل حياتياتي عملن تي اثر انداز ڪري سگھن ٿا جهڙوڪ اينٽي اپوپٽوسس، اينجيوجنسيس، ۽ ميٽاساسس ٽومر مائڪرو ماحول ۾.خاص طور تي، miRNAs (miRNAs)، ننڍڙا نان ڪوڊنگ RNAs اٽڪل 22 نيوڪليوٽائڊس جي ڊيگهه ۾، اهم پوسٽ ٽرانسڪرپشن جين ريگيوليٽر آهن جيڪي miRNA-induced silencing complex (miRISC) ذريعي انساني mRNA جي 30 سيڪڙو کان وڌيڪ ڪنٽرول ڪن ٿا.Toxoplasma gondii متاثر ٿيل ميزبانن ۾ miRNA اظهار کي ڪنٽرول ڪندي حياتياتي عملن کي ٽوڙي سگهي ٿو.ميزبان miRNAs ۾ ميزبان جي حياتياتي عملن کي منظم ڪرڻ لاءِ اهم نشانيون شامل آهن پرازي جي بقا جي حڪمت عملي حاصل ڪرڻ لاءِ.اهڙيءَ طرح، T. gondii سان انفيڪشن تي ميزبان miRNA پروفائل ۾ تبديلين جو مطالعو اسان کي ميزبان ۽ T. gondii جي وچ ۾ رابطي کي وڌيڪ واضح طور تي سمجهڻ ۾ مدد ڪري سگھن ٿا.درحقيقت، Thirugnanam et al.15 تجويز ڪيو ته T. gondii خاص ميزبان miRNAs تي ان جي اظهار کي تبديل ڪندي دماغ جي ڪارڪينوجنسي کي فروغ ڏئي ٿو جيڪو ٽيمر جي واڌ سان لاڳاپيل آهي ۽ ڏٺائين ته T. gondii تجرباتي جانورن ۾ گليوماس جو سبب بڻجي سگهي ٿو.
هي اڀياس ميزبان مائڪروگليا ۾ Exosomal miR-21 جي ڦيرڦار تي ڌيان ڏئي ٿو Toxoplasma BV2 سان متاثر ٿيل.اسان FoxO1/p27 جي نيوڪيوس ۾ برقرار رکڻ جي ڪري U87 گليوم سيلز جي واڌ ۾ بدليل exosomal miR-21 جو ممڪن ڪردار ڏٺو، جيڪو حدف آهي overexpressed miR-21 جو.
BV2 مان نڪتل Exosomes فرق سينٽرفيوگريشن استعمال ڪندي حاصل ڪيا ويا ۽ مختلف طريقن سان تصديق ڪيا ويا ته جيئن سيلولر اجزاء يا ٻين ويسڪلز سان آلودگي کي روڪڻ لاءِ.SDS-polyacrylamide gel electrophoresis (SDS-PAGE) BV2 سيلز ۽ Exosomes (Figure 1A) مان نڪتل پروٽين جي وچ ۾ الڳ نمونا ڏيکاريا ويا، ۽ نمونن جو جائزو ورتو ويو اليڪس جي موجودگي لاءِ، جنهن جو تجزيو ڪيو ويو مغربي blotting جي exosomal پروٽين مارڪرز ۾.ايلڪس ليبلنگ exosome پروٽينن ۾ مليا پر BV2 سيل lysate پروٽين ۾ نه (Fig. 1B).ان کان علاوه، BV2 مان نڪتل exosomes مان صاف ڪيل آر اين اي کي بايو اينالائيزر استعمال ڪندي تجزيو ڪيو ويو.18S ۽ 28S ribosomal subunits گهٽ ۾ گهٽ ڏٺو ويو exosomal RNA لڏپلاڻ جي نمونن ۾، ظاهر ڪري ٿو قابل اعتماد پاڪائي (شڪل 1C).آخر ۾، ٽرانسميشن اليڪٽران مائڪرو اسڪوپي ڏيکاري ٿي ته مشاهدو ڪيل Exosomes سائيز ۾ اٽڪل 60-150 nm هئا ۽ انهن ۾ هڪ پيالي جهڙو ڍانچو هو، جيڪو Exosome morphology (تصوير 1D) جي عام آهي.
BV2 سيلز مان نڪتل exosomes جي خاصيت.(الف) حفاظتي ڊيٽا شيٽ جو صفحو.پروٽينن کي BV2 سيلز يا BV2 مان نڪتل exosomes کان الڳ ڪيو ويو.پروٽين جا نمونا سيلز ۽ exosomes جي وچ ۾ مختلف آهن.(ب) هڪ exosomal مارڪر جي مغربي بلٽ تجزيو (اليڪس).(سي) BV2 سيلز ۽ BV2 نڪتل exosomes مان صاف ٿيل RNA جو جائزو هڪ بايو اينالائيزر استعمال ڪندي.اهڙيء طرح، BV2 سيلز ۾ 18S ۽ 28S ribosomal subunits exosomal RNA ۾ تمام گهٽ مليا هئا.(D) ٽرانسميشن اليڪٽران مائڪرو اسڪوپي ڏيکاري ٿي ته BV2 سيلز مان الڳ ٿيل Exosomes 2٪ uranyl acetate سان منفي طور تي داغدار هئا.Exosomes لڳ ڀڳ 60-150 nm سائيز ۽ پيالو جي شڪل ۾ آھن (گيت ۽ جنگ، اڻ ڇپيل ڊيٽا).
U87 انساني گليوما سيلز ۾ BV2 نڪتل exosomes جي سيلولر اندروني ٿيڻ جو مشاهدو ڪيو ويو confocal microscopy استعمال ڪندي.PKH26 ليبل ٿيل Exosomes U87 سيلز جي cytoplasm ۾ مقامي آهن.Nuclei DAPI (Fig. 2A) سان داغ ٿيل هئا، اهو ظاهر ڪري ٿو ته BV2 نڪتل exosomes ميزبان سيلز طرفان اندروني ٿي سگهي ٿو ۽ وصول ڪندڙ سيلز جي ماحول کي متاثر ڪري ٿو.
BV2 مان نڪتل Exosomes کي U87 glioma سيلز ۾ داخل ڪرڻ ۽ Toxoplasma RH سان متاثر ٿيل BV2 نڪتل Exosomes U87 glioma سيلز جو وڌاءُ.(الف) Exosomes جيڪي U87 سيلز پاران کنفوڪل مائڪرو اسڪوپي سان ماپيل آهن.U87 glioma سيلز PKH26 (لال) سان ليبل ٿيل exosomes سان يا 24 ڪلاڪن تائين ڪنٽرول کان سواءِ پکڙيل هئا.نيوڪلي DAPI (نيري) سان داغ ٿيل هئا ۽ پوء هڪ ڪنفوڪل خوردبيني جي تحت مشاهدو ڪيو ويو (اسڪيل بار: 10 μm، x 3000).(B) U87 glioma سيل پروپئشن جو اندازو لڳايو ويو سيل پرولريشن پراشن ذريعي.U87 glioma سيلز ظاهر ڪيل وقت لاء exosomes سان علاج ڪيا ويا. *P <0.05 حاصل ڪئي وئي شاگردن جي ٽي ٽيسٽ ذريعي. *P <0.05 حاصل ڪئي وئي شاگردن جي ٽي ٽيسٽ ذريعي. *P < 0,05 получено по t-критерию стьюдента. *P <0.05 شاگردن جي ٽي ٽيسٽ ذريعي. *P <0.05 通过学生t 检验获得. *پي <0.05 * P < 0,05، полученный с помощью t-критерия Стьюдента. * P <0.05 شاگردن جي ٽي-ٽيسٽ استعمال ڪندي حاصل ڪيو.
U87 glioma سيلز ۾ BV2 نڪتل exosomes جي اندروني ٿيڻ جي تصديق ڪرڻ کان پوء، اسان انساني glioma سيلز جي ترقي ۾ BV2 کان نڪتل Toxoplasma نڪتل exosomes جي ڪردار جي تحقيق ڪرڻ لاء سيل پروليريشن اسيسز کي انجام ڏنو.T. gondii-infected BV2 سيلز مان Exosomes سان U87 سيلز جو علاج ڏيکاريو ويو ته T. gondii-infected BV2-derived exosomes ڪنٽرول جي مقابلي ۾ U87 سيلز جي وڏي پيماني تي واڌ جو سبب بڻيا (تصوير 2B).
ان کان علاوه، U118 سيلز جي واڌ ۾ U87 جا ساڳيا نتيجا هئا، جيئن Toxoplasma stimulated exosomes وڌاءُ جي بلند ترين سطحن جو سبب بڻيا (ڊيٽا نه ڏيکاريل).انهن انگن اکرن جي بنياد تي، اسان اهو ظاهر ڪري سگهون ٿا ته BV2 نڪتل Toxoplasma-infected exosomes glioma cell proliferation ۾ اهم ڪردار ادا ڪن ٿا.
Toxoplasma-infected BV2-derived exosomes جي اثر جي تحقيق ڪرڻ لاءِ ٽومر ڊولپمينٽ تي، اسان U87 glioma سيلز کي ننگر چوڪن ۾ داخل ڪيو هڪ xenograft ماڊل لاءِ ۽ انجيڪشن ڪيو BV2-derived exosomes يا RH-infected BV2-derived exosomes.1 هفتي کان پوءِ ٽيومر ظاهر ٿيڻ کان پوءِ، 5 چوٿين جي هر تجرباتي گروپ کي ٽيومر جي ماپ مطابق ورهايو ويو ته جيئن ساڳئي شروعاتي نقطي کي طئي ڪيو وڃي، ۽ ٽيومر جي ماپ 22 ڏينهن تائين ماپي وئي.
U87 xenograft ماڊل سان گڏ چوڪن ۾، خاص طور تي وڏي ٽومر جي ماپ ۽ وزن BV2-derived RH-infected exosome گروپ ۾ 22 ڏينهن تي ڏٺو ويو (Fig. 3A,B).ٻئي طرف، BV2 نڪتل exosome گروپ ۽ exosome علاج کان پوء ڪنٽرول گروپ جي وچ ۾ ٽيمر جي سائيز ۾ ڪو خاص فرق نه هو.ان کان علاوه، glioma سيلز ۽ exosomes سان لڳل چوٿون بصري طور تي RH-infected BV2-derived exosomes (Fig. 3C) جي گروپ ۾ سڀ کان وڏي ٽومر جي مقدار کي ظاهر ڪن ٿا.اهي نتيجا ظاهر ڪن ٿا ته BV2 نڪتل Toxoplasma-infected exosomes هڪ مائوس ٽومر ماڊل ۾ glioma جي واڌ کي وڌايو.
U87 xenograft مائوس ماڊل ۾ BV2 نڪتل Exosomes جو Oncogenesis (AC).طومار جي سائيز (A) ۽ وزن (B) خاص طور تي BALB/c nude چوٿون ۾ وڌي ويا آھن جيڪي BV2 مان نڪتل RH-infected exosomes سان علاج ڪيا ويا آھن.BALB/c nude mice (C) کي ذيلي ذري ذري انجيڪشن ڪيو ويو 1 x 107 U87 سيلز سان Matrigel مرکب ۾ معطل ٿيل.انجيڪشن کان ڇهه ڏينهن پوءِ، 100 μg BV2 نڪتل exosomes کي چوٿين ۾ علاج ڪيو ويو.طومار جي ماپ ۽ وزن ماپ ڪئي وئي اشارو ڏينهن تي ۽ قرباني کان پوء، ترتيب سان. *پي <0.05. *پي <0.05. *R <0,05. *پي <0.05. *پي <0.05. *پي <0.05. *R <0,05. *پي <0.05.
ڊيٽا ڏيکاري ٿي ته 37 miRNAs (16 overexpressed ۽ 21 downexpressed) مدافعتي يا tumor جي ترقي سان جڙيل آهي خاص طور تي مائڪروگليا ۾ تبديل ٿي ويا آهن ٽوڪسوپلازما RH اسٽرين (Fig. 4A) سان انفيڪشن کان پوءِ.تبديل ٿيل miRNAs جي وچ ۾ miR-21 جي نسبتي اظهار جي سطح جي تصديق ڪئي وئي حقيقي وقت RT-PCR پاران BV2 مان نڪتل Exosomes ۾، Exosomes BV2 ۽ U87 سيلز سان علاج ٿيل.miR-21 جو اظهار Toxoplasma gondii (RH strain) (Fig. 4B) سان متاثر ٿيل BV2 سيلز مان نڪرندڙن ۾ نمايان اضافو ڏيکاري ٿو.BV2 ۽ U87 سيلز ۾ miR-21 جي لاڳاپي واري اظهار جي سطح تبديل ٿيل Exosomes (Fig. 4B) جي اپٽيڪ کان پوء وڌي وئي.ٽومر جي مريضن جي دماغي بافتن ۾ miR-21 اظهار جي لاڳاپي سطح ۽ Toxoplasma gondii (ME49 strain) سان متاثر ٿيل چوٿون، بالترتيب ڪنٽرولن کان وڌيڪ هئا (تصوير 4C).اهي نتيجا ويٽرو ۽ وييو ۾ پيش ڪيل ۽ تصديق ٿيل مائڪرو آر اين ايز جي اظهار جي سطحن جي وچ ۾ فرق سان تعلق رکن ٿا.
Toxoplasma gondii (RH) سان متاثر ٿيل مائڪروگليا ۾ exosomal miP-21a-5p جي اظهار ۾ تبديليون.(الف) T. gondii RH انفيڪشن کان پوءِ مدافعت يا تومر جي ترقي سان لاڳاپيل siRNA ۾ اهم تبديليون ڏيکاري ٿو.(B) لاڳاپا miR-21 ايڪسپريس ليول معلوم ڪيا ويا حقيقي وقت RT-PCR ذريعي BV2 نڪتل exosomes، BV2-علاج ٿيل exosomes، ۽ U87 سيلز ۾.(سي) لاڳاپا miR-21 اظهار جي سطح مليا ويا دماغ جي بافتن ۾ ٽيمر جي مريضن (N = 3) ۽ چوٿين سان متاثر ٿيل Toxoplasma gondii (ME49 strain) (N = 3). *P <0.05 حاصل ڪئي وئي شاگردن جي ٽي ٽيسٽ ذريعي. *P <0.05 حاصل ڪئي وئي شاگردن جي ٽي ٽيسٽ ذريعي. *P < 0,05 было получено с помощью t-критерия Стьюдента. *P <0.05 شاگردن جي ٽي ٽيسٽ ذريعي حاصل ڪئي وئي. *P <0.05 通过学生t 检验获得. *پي <0.05 * پي <0,05، полученный с помощью t-критерия Стьюдента. * P <0.05 شاگردن جي ٽي-ٽيسٽ استعمال ڪندي حاصل ڪيو.
RH-infected BV2 سيلز مان Exosomes vivo ۽ vitro ۾ gliomas جي واڌ جو سبب بڻيا (تصوير 2, 3).لاڳاپيل mRNAs کي ڳولڻ لاءِ، اسان اينٽيٽيمر ٽارگيٽ جينز، فورڪ هيڊ باڪس O1 (FoxO1) PTEN، ۽ پروگرام ٿيل سيل ڊيٿ 4 (PDCD4) جي ايم آر اين اي جي سطحن جي جانچ ڪئي U87 سيلز ۾ BV2 يا RH BV2 مان نڪتل Exosomes سان متاثر ٿيل.بايو انفارميٽڪس جي تجزيي ڏيکاري ٿي ته ڪيترن ئي تومر سان لاڳاپيل جينز، جن ۾ FoxO1، PTEN، ۽ PDCD4 جينز شامل آهن، miR-2121,22 پابند سائيٽون آهن.RH-infected BV2-derived exosomes ۾ BV2-derived exosomes (Fig. 5A) جي مقابلي ۾ antitumor ٽارگيٽ جين جي mRNA سطح گھٽجي وئي.FoxO1 RH-infected BV2-derived exosomes ۾ BV2-derived exosomes (Figure 5B) جي مقابلي ۾ گھٽ پروٽين جي سطح ڏيکاري ٿي.انهن نتيجن جي بنياد تي، اسان تصديق ڪري سگهون ٿا ته RH-infected BV2 مان نڪتل exosomes اينٽي آنڪوجينڪ جينز کي گهٽائي ڇڏيندا آهن، انهن جي ڪردار کي برقرار رکڻ ۾ ٽيمر جي واڌ ۾.
Toxoplasma RH-infected BV2-derived exosomes U87 glioma Cells ۾ اينٽيٽيمر جينز کي دٻائڻ جو سبب بڻجن ٿا Toxoplasma RH-infected BV2-derived exosomes.(الف) PBS exosomes جي مقابلي ۾ T. gondii RH-infected BV2 مان نڪتل exosomes ۾ FoxO1، PTEN ۽ PDCD4 ايڪسپريشن جي حقيقي وقت جي PCR.β-actin mRNA هڪ ڪنٽرول طور استعمال ڪيو ويو.(B) FoxO1 جو اظهار مغربي بلٽنگ پاران طئي ڪيو ويو ۽ densitometry ڊيٽا شماري طور تي تصويري جي پروگرام استعمال ڪندي جائزو ورتو ويو. *P <0.05 حاصل ڪئي وئي شاگردن جي ٽي ٽيسٽ ذريعي. *P <0.05 حاصل ڪئي وئي شاگردن جي ٽي ٽيسٽ ذريعي. *P < 0,05 было получено с помощью t-критерия Стьюдента. *P <0.05 شاگردن جي ٽي ٽيسٽ ذريعي حاصل ڪئي وئي. *P <0.05 通过学生t 检验获得. *پي <0.05 * پي <0,05، полученный с помощью t-критерия Стьюдента. * P <0.05 شاگردن جي ٽي-ٽيسٽ استعمال ڪندي حاصل ڪيو.
miP-21 جي اثر کي سمجھڻ لاءِ exosomes ۾ tumor سان لاڳاپيل جين ريگيوليشن تي، U87 سيلز MiP-21 جي هڪ انابيٽر سان Lipofectamine 2000 استعمال ڪندي منتقل ڪيا ويا ۽ سيلز کي منتقلي کان 24 ڪلاڪ پوءِ گڏ ڪيو ويو.FoxO1 ۽ p27 ايڪسپريس ليول سيلز ۾ منتقل ٿيل miR-21 inhibitors سان qRT-PCR (Fig. 6A,B) استعمال ڪندي BV2 نڪتل Exosomes سان علاج ڪيل سيلز سان مقابلو ڪيو ويو.U87 سيلز ۾ miR-21 inhibitor جي منتقلي خاص طور تي FoxO1 ۽ p27 اظهار (FIG. 6) کي گهٽائي ڇڏيو.
RH-infected exosomal BV2-derived miP-21 U87 glioma سيلز ۾ FoxO1/p27 اظهار کي تبديل ڪيو.U87 سيلز MiP-21 inhibitor سان Lipofectamine 2000 استعمال ڪندي منتقل ڪيا ويا ۽ سيلز کي منتقلي کان 24 ڪلاڪن بعد حاصل ڪيو ويو.FoxO1 ۽ p27 ايڪسپريس ليول سيلز ۾ منتقل ٿيل miR-21 inhibitors سان qRT-PCR (A, B) استعمال ڪندي BV2 نڪتل exosomes سان علاج ڪيل سيلز جي سطحن جي مقابلي ۾.
ميزبان جي مدافعتي ردعمل کان بچڻ لاء، Toxoplasma parasite ٽشو سيسٽ ۾ تبديل ٿي وڃي ٿي.اهي مختلف بافتن کي پاراسائيز ڪن ٿا، جن ۾ دماغ، دل، ۽ کنڊ جي عضون شامل آهن، ميزبان جي سڄي زندگي ۾ ۽ ميزبان جي مدافعتي ردعمل کي تبديل ڪن ٿا.ان کان سواء، اهي سيل جي چڪر کي منظم ڪري سگهن ٿا ۽ ميزبان سيلز جي اپوپٽوسس، انهن جي واڌاري کي وڌائڻ 14,24.Toxoplasma gondii خاص طور تي ميزبان ڊينڊريٽڪ سيلز، نيوٽروفيلس، ۽ مونوسائيٽ / ميڪروفيج نسب کي متاثر ڪري ٿو، بشمول دماغ مائڪروگليا.Toxoplasma gondii M2 phenotype جي macrophages جي فرق کي متاثر ڪري ٿو، پيٽروجن جي انفيڪشن کان پوء زخم جي شفا کي متاثر ڪري ٿو، ۽ پڻ hypervascularization ۽ granulomatous fibrosis سان لاڳاپيل آهي.Toxoplasma انفيڪشن جي هن رويي جي pathogenesis ٽمور جي ترقي سان لاڳاپيل نشانن سان لاڳاپيل ٿي سگهي ٿو.Toxoplasma پاران منظم ڪيل دشمني واري ماحول شايد ساڳئي اڳڪٿين وانگر ٿي سگھي ٿي.تنهن ڪري، اهو فرض ڪري سگهجي ٿو ته Toxoplasma انفيڪشن دماغ جي tumors جي ترقي ۾ حصو وٺڻ گهرجي.حقيقت ۾، Toxoplasma انفيڪشن جي اعلي شرح مختلف دماغ tumors سان مريضن جي سيرم ۾ ٻڌايو ويو آهي.ان کان علاوه، Toxoplasma gondii ٿي سگهي ٿو هڪ ٻيو ڪارڪينجينڪ اثر ڪندڙ ۽ ڪم ڪري ٿو synergistically جي مدد ڪرڻ لاءِ ٻين انتشار واري ڪارڪينوجن کي دماغي ٽومر کي وڌائڻ ۾.ان سلسلي ۾، اها ڳالهه نوٽ ڪرڻ جي قابل آهي ته P. falciparum ۽ Epstein-Barr وائرس synergistically Burkitt جي lymphoma جي ٺهڻ ۾ مدد ڪري.
ڪينسر جي تحقيق جي ميدان ۾ ريگيوليٽر طور exosomes جو ڪردار وڏي پيماني تي تحقيق ڪئي وئي آهي.بهرحال، پرجيز ۽ متاثر ٿيل ميزبانن جي وچ ۾ exosomes جو ڪردار خراب طور تي سمجھيو ويو آهي.هينئر تائين، مختلف ريگيوليٽر، جن ۾ ڳجهي پروٽين شامل آهن، انهن حياتياتي عملن جي وضاحت ڪئي آهي، جن جي ذريعي پروٽوزوان پارسائٽس ميزبان حملي جي مزاحمت ڪن ٿا ۽ انفيڪشن کي دائمي بڻائين ٿا.تازو، اتي هڪ وڌندڙ تصور پيدا ٿيو آهي ته پروٽوزوان سان لاڳاپيل مائڪرو ويسڪلز ۽ انهن جا مائڪرو آر اين ايز ميزبان سيلن سان رابطو ڪن ٿا ته جيئن انهن جي بقا لاءِ سازگار ماحول پيدا ٿئي.تنهن ڪري، تبديل ٿيل exosomal miRNAs ۽ glioma cell proliferation جي وچ ۾ تعلق کي ڳولڻ لاءِ وڌيڪ مطالعي جي ضرورت آهي.مائڪرو آر اين اي جي ڦيرڦار (ڪلسٽر جينز miR-30c-1، miR-125b-2، miR-23b-27b-24-1 ۽ miR-17-92) ٽوڪسوپلازما متاثر ٿيل انساني ميڪروفيجز ۾ STAT3 پروموٽر سان جڙيل آهي، ضابطو ڪيو ويندو آهي ۽ مخالف پيدا ڪري ٿو. Toxoplasma gondii انفيڪشن 29 جي جواب ۾ apoptosis.Toxoplasma انفيڪشن miR-17-5p ۽ miR-106b-5p جي اظهار کي وڌائي ٿو، جيڪي ڪيترن ئي هائپر پروليفيريٽ بيمارين سان لاڳاپيل آهن 30.اهي ڊيٽا تجويز ڪن ٿا ته ميزبان miRNAs جو ضابطو Toxoplasma انفيڪشن طرفان ڪيو ويو آهي پرجيز جي بقا لاءِ اهم ماليڪيولز ۽ ميزبان جي حياتياتي رويي ۾ pathogenesis.
تبديل ٿيل miRNAs خطرناڪ سيلن جي شروعات ۽ ترقي دوران مختلف قسم جي رويي تي اثر انداز ڪري سگهن ٿا، جن ۾ گليوماس شامل آهن: ترقي جي سگنلن جي خودمختاري، ترقي کي روڪڻ واري سگنلن جي غير حساسيت، اپوپٽوسس جي چوري، لامحدود نقل واري صلاحيت، اينجيوجنسيس، حملي ۽ ميٽاساسس، ۽ انفلامام.گليما ۾، تبديل ٿيل miRNAs جي نشاندهي ڪئي وئي آهي ڪيترن ئي اظهار جي پروفائيلنگ مطالعي ۾.
موجوده مطالعي ۾، اسان toxoplasma-infected ميزبان سيلز ۾ miRNA-21 اظهار جي اعلي سطح جي تصديق ڪئي.miR-21 جي سڃاڻپ ڪئي وئي آهي اڪثر گهڻو ڪري وڌيڪ ايڪسپريس ٿيل مائڪرو آر اين ايز مان هڪ مضبوط ٽامي ۾، جنهن ۾ گليوماس، 33 ۽ ان جو اظهار گليوم جي گريڊ سان تعلق رکي ٿو.جمع ٿيندڙ ثبوتن مان معلوم ٿئي ٿو ته miR-21 هڪ ناول آنڪوجين آهي جيڪو گلويوما جي واڌ ۾ هڪ اينٽي اپوپٽوٽڪ عنصر طور ڪم ڪري ٿو ۽ انساني دماغ جي خرابين جي ٽشوز ۽ پلازما ۾ تمام گهڻو متاثر ٿيل آهي.دلچسپ ڳالهه اها آهي ته، گليوما سيلز ۽ بافتن ۾ miR-21 غير فعال ٿيڻ، ڪئسپيس-انحصار اپوپٽوسس جي ڪري سيل جي ڦهلائڻ جي روڪٿام کي متحرڪ ڪري ٿو.miR-21 جي اڳڪٿي ڪيل هدفن جو بايو انفارميٽڪ تجزيو ظاهر ڪيو ويو آهي ته ڪيترن ئي ٽومر سپپريسر جينز اپوپٽوسس رستا سان جڙيل آهن، بشمول پروگرام ٿيل سيل ڊيٿ 4 (PDCD4)، ٽرپوميوسين (TPM1)، PTEN، ۽ فورڪ هيڊ باڪس O1 (FoxO1)، miR-2121 پابند سائيٽ سان..22.38.
FoxO1، ٽرانسڪرپشن فيڪٽرز (FoxO) مان هڪ آهي، انساني ڪينسر جي مختلف قسمن جي ترقي ۾ ملوث آهي ۽ ٽيمر کي دٻائڻ واري جين جهڙوڪ p21، p27، Bim، ۽ FasL40 جي اظهار کي منظم ڪري سگهي ٿو.FoxO1 سيل جي ترقي کي دٻائڻ لاءِ سيل سائيڪل جي رڪاوٽن کي پابند ۽ چالو ڪري سگھي ٿو جهڙوڪ p27.ان کان علاوه، FoxO1 PI3K/Akt سگنلنگ جو هڪ اهم اثر ڪندڙ آهي ۽ ڪيترن ئي حياتياتي عملن کي منظم ڪري ٿو جهڙوڪ سيل چڪر جي ترقي ۽ سيل جي فرق کي p2742 ٽرانسپشن جي چالو ڪرڻ ذريعي.
نتيجي ۾، اسان يقين رکون ٿا ته Exosomal miR-21 Toxoplasma-infected microglia مان نڪتل ٿي سگھي ٿو گليما سيلز جي ترقي ريگيوليٽر جي طور تي اهم ڪردار ادا ڪري سگھي ٿو (Fig. 7).بهرحال، وڌيڪ مطالعي جي ضرورت آهي ته exosomal miR-21 جي وچ ۾ سڌي ڪڙي ڳولڻ، تبديل ٿيل Toxoplasma انفيڪشن، ۽ glioma واڌ.انهن نتيجن جي توقع ڪئي وئي آهي ته Toxoplasma انفيڪشن ۽ glioma جي واقعن جي وچ ۾ تعلق جي مطالعي لاء هڪ شروعاتي نقطي مهيا ڪن.
هن مطالعي ۾ glioma (دماغ) carcinogenesis جي ميکانيزم جو هڪ اسڪيمي ڊراگرام پيش ڪيو ويو آهي.ليکڪ پاورپوائنٽ 2019 (Microsoft, Redmond, WA) ۾ ٺاھيو.
هن مطالعي ۾ سڀ تجرباتي پروٽوڪول، بشمول جانورن جي استعمال، سيول نيشنل يونيورسٽي جانورن جي سنڀال ۽ استعمال ڪندڙ ڪميٽي جي معياري اخلاقي هدايتن جي مطابق هئا ۽ سيول نيشنل يونيورسٽي اسڪول آف ميڊيسن جي اداري جائزو بورڊ (IRB نمبر SNU- 150715).-2).سڀ تجرباتي طريقا ARRIVE سفارشن جي مطابق ڪيا ويا.
BV2 ماؤس مائڪروگليا ۽ U87 انساني گليوما سيلز ڊولبيڪو جي تبديل ٿيل ايگلز ميڊيم (DMEM؛ ويلگين، سيول، ڪوريا) ۽ روزويل پارڪ ميموريل انسٽيٽيوٽ ميڊيم (RPMI؛ ويلگين) ۾ ڪلچر ڪيا ويا، هر هڪ تي مشتمل آهي 10٪ fetal bovine serum، ml-4. گلوٽامين، 0.2 ايم ايم پينسلين ۽ 0.05 ايم ايم اسٽريپووميسن.سيلز هڪ انڪيوبيٽر ۾ 5% CO2 سان 37 ° C تي ڪلچر ڪيا ويا.ٻيو glioma سيل لائن، U118، U87 سيلز سان مقابلي لاء استعمال ڪيو ويو.
T. gondii-infected RH ۽ ME49 strains مان Exosomes کي الڳ ڪرڻ لاءِ، T. gondii tachyzoites (RH strain) 3-4 ڏينهن اڳ 6-هفتي پراڻي BALB/c چوهڙن جي پيٽ جي گفا مان ڪڍيا ويا هئا.Tachyzoites PBS سان ٽي ڀيرا ڌوئي ويا ۽ 40٪ Percoll (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA) 43 ۾ سينٽرفيوگريشن ذريعي صاف ڪيا ويا.ME49 جي ٽچيزائٽس کي حاصل ڪرڻ لاءِ، BALB/c چوڪن کي intraperitoneally 20 ٽشو سيسٽن سان لڳايو ويو ۽ سيسٽن ۾ tachyzoite ٽرانسفارميشن کي گڏ ڪيو ويو انفڪشن (PI) کان پوءِ 6-8 ڏينهن تي پيٽ جي گفا کي ڌوئڻ سان.چوٿون PBS سان متاثر ٿيل.ME49 tachyzoites 100 μg/ml penicillin (Gibco/BRL, Grand Island, NY, USA)، 100 μg/ml streptomycin (Gibco/BRL)، ۽ 5% fetal bovine serum (Lonza, Walkersville, MD) سان اضافي ڪيل سيلن ۾ وڌيا ويا. ..، USA) 37 ° C ۽ 5٪ ڪاربان ڊاء آڪسائيڊ تي.ويرو سيلز ۾ پوکڻ کان پوءِ، ME49 ٽيچيزائٽس کي ٻه ڀيرا 25 گيج جي سوئي ذريعي ۽ پوءِ 5 µm فلٽر ذريعي ملبو ۽ سيلز کي هٽايو ويو.ڌوئڻ کان پوء، tachyzoites PBS44 ۾ بحال ڪيا ويا.Toxoplasma gondii strain ME49 جي ٽشو سيسٽن کي متاثر ٿيل C57BL/6 چوٿون (Orient Bio Animal Center, Seongnam, Korea) جي دماغ مان الڳ ٿيل سسٽن جي intraperitoneal انجيڪشن ذريعي برقرار رکيو ويو.ME49 سان متاثر ٿيل چوٿين جي دماغن کي PI جي 3 مهينن کان پوءِ گڏ ڪيو ويو ۽ سسٽن کي الڳ ڪرڻ لاءِ خوردبيني جي هيٺان ڪٽيو ويو.متاثر ٿيل چوٿين کي سيول نيشنل يونيورسٽي اسڪول آف ميڊيسن ۾ اسپيشل پيٿوجن فري حالتن (SPF) تحت رکيو ويو.
ٽوٽل آر اين اي BV2 مان نڪتل Exosomes، BV2 سيلز ۽ ٽشوز مان ڪڍيو ويو miRNeasy Mini Kit (Qiagen, Hilden, Germany) استعمال ڪندي ٺاهيندڙ جي هدايتن مطابق، جنهن ۾ ايليوشن قدم لاءِ انڪيوبيشن ٽائيم شامل آهي.آر اين اي ڪنسنٽريشن هڪ NanoDrop 2000 spectrophotometer تي طئي ڪيو ويو.آر اين اي مائيڪرويئرز جي معيار جو جائزو ورتو ويو Agilent 2100 bioanalyzer (Agilent Technologies, Amstelveen, the Netherlands).
DMEM 10% exosome-poor FBS سان 100,000g تي 16 ڪلاڪن لاءِ 4°C تي ultracentrifugation ذريعي تيار ڪيو ويو ۽ 0.22 µm فلٽر ذريعي فلٽر ڪيو ويو (Nalgene, Rochester, NY, USA).BV2 سيلز، 5 × 105، DMEM ۾ ڪلچر ڪيا ويا جن ۾ 10% exosome-depleted FBS ۽ 1% اينٽي بايوٽيڪس 37°C ۽ 5% CO2 تي مشتمل آهي.انڪيوبيشن جي 24 ڪلاڪن کان پوءِ، اسٽريٽ RH يا ME49 (MOI = 10) جا ٽيچيزائٽس سيلز ۾ شامل ڪيا ويا ۽ هڪ ڪلاڪ اندر غير حملي آور پارسائٽس کي هٽايو ويو ۽ DMEM سان ڀريو ويو.BV2 سيلز مان Exosomes تبديل ٿيل فرق سينٽرفيوگريشن ذريعي الڳ ڪيا ويا، سڀ کان وڏي پيماني تي استعمال ٿيل طريقو.آر اين اي يا پروٽين جي تجزيي لاءِ 300 μl PBS ۾ Exosome pellet کي ٻيهر بحال ڪريو.الڳ ٿيل exosomes جي ڪنسنٽريشن جو اندازو لڳايو ويو BCA پروٽين جي آسي کٽ (Pierce, Rockford, IL, USA) ۽ هڪ NanoDrop 2000 spectrophotometer استعمال ڪندي.
BV2 سيلز يا BV2 مان نڪتل exosomes مان نڪتل PRO-PREP™ پروٽين جي اضافي حل (iNtRon Biotechnology, Seongnam, Korea) ۾ lysed ڪيا ويا ۽ پروٽين کي Coomassie briliant blue stained 10% SDS polyacrylamide gels تي لوڊ ڪيو ويو.ان کان سواء، پروٽين کي 2 ڪلاڪن تائين PVDF جھلي ڏانهن منتقل ڪيو ويو.اليڪس اينٽي باڊي (سيل سگنلنگ ٽيڪنالوجي، بيورلي، ايم اي، يو ايس اي) استعمال ڪندي مغربي بلٽ جي تصديق ڪئي وئي هڪ exosomal مارڪر طور.HRP-conjugated goat anti-mouse IgG (H + L) (Bethyl Laboratories, Montgomery, TX, USA) ۽ LAS-1000 پلس luminescent image analyzer (Fuji Photographic Film, Tokyo, Japan) ثانوي اينٽي باڊي طور استعمال ڪيا ويا..Exosomes جي سائيز ۽ مورفولوجي جي مطالعي لاء ٽرانسميشن اليڪٽران مائڪروسکوپي ڪئي وئي.BV2 سيلز (6.40 µg/µl) کان الڳ ٿيل Exosomes ڪاربان-ڪوٽيڊ ميشز تي تيار ڪيا ويا ۽ 1 منٽ لاءِ 2٪ يورانيل ايڪٽيٽ سان ناڪاري داغ.تيار ڪيل نمونا 80 kV جي تيز رفتار وولٹیج تي JEOL 1200-EX II (Tokyo, Japan) استعمال ڪندي ES1000W Erlangshen CCD ڪئميرا (Gatan, Pleasanton, CA, USA) سان ليس ڪيا ويا.
BV2 مان نڪتل Exosomes کي PKH26 ريڊ فلورسنٽ لنڪر ڪٽ (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA) استعمال ڪندي ڪمري جي حرارت تي 15 منٽن لاءِ داغ ڪيو ويو.U87 سيلز، 2×105، PKH26-ليبل ٿيل Exosomes (red) سان يا منفي ڪنٽرول جي طور تي ڪو به exosomes نه آهن، هڪ 5% CO2 انڪيوبيٽر ۾ 24 ڪلاڪن لاءِ 37°C تي پکڙيل هئا.U87 سيل نيوڪلي کي DAPI (نيري) سان داغ ڪيو ويو، U87 سيلز کي 4٪ paraformaldehyde ۾ 15 منٽ لاء 4 ° C تي مقرر ڪيو ويو ۽ پوء لييڪا TCS SP8 STED CW confocal microscope system (Leica Microsystems, Mannheim, Germany) ۾ تجزيو ڪيو ويو.قابل مشاهدو.
cDNA siRNA مان ٺهيل هئي مير-X siRNA فرسٽ اسٽرينڊ سنٿيسس ۽ SYBR qRT-PCR کٽ (Tkara Bio Inc., Shiga, Japan) استعمال ڪندي.ريئل ٽائيم مقداري پي سي آر iQ5 ريئل ٽائيم پي سي آر ڊيٽيڪشن سسٽم (بائيو-ريڊ، هرڪيولس، CA، USA) استعمال ڪندي ڪيو ويو پرائمر ۽ ٽيمپليٽس کي SYBR پريمڪس سان ملايو ويو.ڊي اين اي کي 40 دورن لاءِ 95 ڊگري سينٽي گريڊ تي 15 سيڪنڊن لاءِ ۽ 60 ڊگري سينٽي گريڊ تي 60 سينٽي گريڊ تي اينيلنگ ڪيو ويو.هر پي سي آر جي رد عمل مان ڊيٽا جو تجزيو ڪيو ويو ڊيٽا تجزياتي ماڊل استعمال ڪندي iQ™5 آپٽيڪل سسٽم سافٽ ويئر (Bio-Rad).چونڊيل ٽارگيٽ جينس ۽ β-actin/siRNA (۽ U6) جي وچ ۾ جين اظهار ۾ لاڳاپا تبديلين کي معياري وکر طريقو استعمال ڪندي حساب ڪيو ويو.استعمال ٿيل پرائمر تسلسل جدول 1 ۾ ڏيکاريل آھن.
3 x 104 U87 گليوما سيلز 96-سٺي پليٽن ۾ ٻج ڪيا ويا ۽ BV2 (50 μg/mL) مان نڪتل Toxoplasma-inffected exosomes سان ملايا ويا يا BV2 (50 μg/mL) مان نڪتل غير پلس exosomes کي 12، 18 ۽ 13 ڪلاڪ تي ڪنٽرول ڪيو ويو. .سيل ڳڻڻ جي ڪٽ-8 (Dojindo, Kumamoto, Japan) (ضمني انگ اکر S1-S3) 46 استعمال ڪندي سيل جي واڌ جي شرح طئي ڪئي وئي.
5-هفتي جي عورت BALB/c ننڍڙا چوڪا Orient Bio (Seongnam-si، South Korea) مان خريد ڪيا ويا ۽ انفرادي طور تي جراثيم کان پاڪ پنجرن ۾ ڪمري جي حرارت (22 ± 2 ° C) ۽ نمي (45 ± 15 ° C) تي رکيا ويا.٪) ڪمري جي حرارت تي (22 ± 2 ° C) ۽ نمي (45 ± 15٪).هڪ 12 ڪلاڪ هلڪو چڪر ۽ 12 ڪلاڪ اونداهي چڪر SPF (سيول نيشنل يونيورسٽي اسڪول آف ميڊيسن اينيمل سينٽر) تحت ڪيو ويو.چوڪن کي بي ترتيب طور تي 5 چوڪن جي ٽن گروپن ۾ ورهايو ويو هو ۽ سڀني گروپن کي 400 ml PBS جي 1 x 107 U87 glioma سيلز تي مشتمل هوندو هو ۽ ترقي جو عنصر گهٽايو ويو BD Matrigel™ (BD Science, Miami, FL, USA).ٽيومر انجيڪشن کان ڇهه ڏينهن پوءِ، BV2 سيلز مان نڪتل 200 mg exosomes (Toxoplasma انفيڪشن کان سواءِ) ٽيومر سائيٽ ۾ داخل ڪيا ويا.ٽيومر جي انفيڪشن کان 22 ڏينهن بعد، هر گروپ ۾ چوٿون جي ٽيومر جي ماپ کي ڪليپر سان ماپ ڪيو ويو هفتي ۾ ٽي ڀيرا، ۽ ٽيومر جي مقدار کي فارمولا سان حساب ڪيو ويو: 0.5 × (چوڪر) × 2 × ڊگھائي.
MiRCURYTM LNA miRNA array استعمال ڪندي MicroRNA ايڪسپريسشن جو تجزيو، 7th نسل has, mmu and rno arrays (EXIQON, Vedbaek, Denmark) 3100 انسانن، ماؤس ۽ چوٿون miRNA ڪيپچر پروبس جي وچ ۾ 1119 چڱي خاصي خصوصيت رکندڙ چوڪن کي ڍڪيندي.هن عمل دوران، ڪل RNA جي 250 کان 1000 ng کي 5′-phosphate مان ڪڍيو ويو ڪلف انٽيسٽينل الڪائن فاسفيٽ سان علاج ڪرڻ سان، جنهن بعد Hy3 گرين فلورسنٽ ڊائي سان ليبلنگ ڪئي وئي.ليبل ٿيل نمونن کي پوءِ هائبرڊائيزيشن چيمبر ڪٽ (Agilent Technologies, Santa Clara, CA, USA) ۽ هڪ هائبرڊائيزيشن سلائيڊ ڪٽ (Agilent Technologies) استعمال ڪندي مائڪرو اري سلائيڊ لوڊ ڪندي هائبرڊائيز ڪيو ويو.هائبرڊائيزيشن 16 ڪلاڪن تائين 56 ° C تي ڪيو ويو، پوء ٺاهيندڙن جي سفارشن جي مطابق مائڪرو ايري ڌوئي ويا.پروسيس ٿيل مائڪروري سلائڊ وري هڪ Agilent G2565CA مائڪروريري اسڪينر سسٽم (Agilent Technologies) استعمال ڪندي اسڪين ڪيو ويو.اسڪين ٿيل تصويرن کي استعمال ڪيو ويو Agilent Feature Extraction سافٽ ويئر ورزن 10.7.3.1 (Agilent Technologies) ۽ هر تصوير جي فلورسنس شدت کي تبديل ٿيل Exiqon پروٽوڪول جي لاڳاپيل GAL فائل استعمال ڪندي مقدار ۾ ڪيو ويو.موجوده مطالعي لاء Microarray ڊيٽا GEO ڊيٽابيس ۾ رسائي نمبر GPL32397 تحت جمع ٿيل آهن.
Toxoplasma سان متاثر ٿيل RH يا ME49 strains جي microglia ۾ بالغ exosomal miRNAs جي ايڪسپريشن پروفائلز کي مختلف نيٽ ورڪ ٽولز استعمال ڪندي تجزيو ڪيو ويو.miRNAs جو تعلق ٽيمر جي ترقي سان لاڳاپيل miRWalk2.0 (http://mirwalk.umm.uni-heidelberg.de) استعمال ڪندي ڪيو ويو ۽ 8.0 کان وڌيڪ معمولي سگنل جي شدت (log2) سان فلٽر ڪيو ويو.miRNAs جي وچ ۾، مختلف طور تي ظاهر ڪيل miRNAs مليا ويا 1.5-fold کان وڌيڪ تبديل ٿيل miRNAs جي فلٽر تجزيي ذريعي تبديل ٿيل RH يا ME49 اسٽرين پاران T. gondii سان متاثر ٿيل.
سيلز کي ڇهن-سٺي پليٽن ۾ ٻج ڪيو ويو (3 x 105 سيلز / چڱي طرح) Opti-MEM (Gibco, Carlsbad, CA, USA) Lipofectamine 2000 (Invitrogen, Carlsbad, CA, USA) استعمال ڪندي.منتقل ٿيل سيلز کي 6 ڪلاڪن تائين ڪلچر ڪيو ويو ۽ پوء وچولي کي تازو مڪمل وچولي ۾ تبديل ڪيو ويو.سيلز منتقلي کان 24 ڪلاڪن بعد حاصل ڪيا ويا.
شمارياتي تجزيا بنيادي طور تي شاگردن جي ٽي ٽيسٽ کي Excel سافٽ ويئر (Microsoft, Washington, DC, USA) سان استعمال ڪندي ڪيو ويو.تجرباتي جانورن جي تجزيي لاءِ، پرزم 3.0 سافٽ ويئر (GraphPad Software, La Jolla, CA, USA) استعمال ڪندي ٻه طرفي ANOVA ڪئي وئي. P-values ​​<0.05 کي شماريات جي لحاظ کان اهم قرار ڏنو ويو. P-values ​​<0.05 کي شماريات جي لحاظ کان اهم قرار ڏنو ويو. Значения P <0,05 считались статистически значимыми. P قدر <0.05 کي شمارياتي لحاظ کان اهم سمجهيو ويو. پي 值< 0.05 被认为具有统计学意义. پي 值 <0.05 Значения P <0,05 считались статистически значимыми. P قدر <0.05 کي شمارياتي لحاظ کان اهم سمجهيو ويو.
هن مطالعي ۾ استعمال ٿيل سڀئي تجرباتي پروٽوڪول سيول نيشنل يونيورسٽي اسڪول آف ميڊيسن (IRB نمبر SNU-150715-2) جي اداري جائزو بورڊ پاران منظور ڪيا ويا.
The data used in this study are available upon reasonable request from the first author (BK Jung; mulddang@snu.ac.kr). And the microarray data for the current study is deposited in the GEO database under registration number GPL32397.
فرلي، جي وغيره.2018 ۾ عالمي ڪينسر جي واقعن ۽ موت جي اندازي مطابق: GLOBOCAN ذريعن ۽ طريقا.تعبير.جي. رک 144، 1941-1953 (2019).
رشيد، ايس، رحمان، ڪي ۽ آڪاش، ايم ايس دماغ جي ٽامي جي خطري جي عنصر ۽ انهن جي علاج واري مداخلت ۾ هڪ بصيرت. رشيد، ايس، رحمان، ڪي ۽ آڪاش، ايم ايس دماغ جي ٽامي جي خطري جي عنصر ۽ انهن جي علاج واري مداخلت ۾ هڪ بصيرت.رشيد، ايس، رحمان، ڪي ۽ آڪاش، ايم ايس دماغ جي ٽمورز ۽ وڏي علاج واري مداخلت لاء خطري جي عنصر جو جائزو. رشيد، ايس، رحمان، ڪي ۽ آڪاش، ايم ايس 深入了解脑肿瘤的危险因素及其治疗干预措施. رشيد، ايس.، رحمان، ڪي ۽ آڪاش، ايم ايس ڊيپ سمجھڻ جي دماغ جي ٽمور جي خطري جا عنصر ۽ علاج جي مداخلت.رشيد، ايس، رحمان، ڪي ۽ آڪاش، ايم ايس دماغ جي ٽمورز ۽ وڏي علاج واري مداخلت لاء خطري جي عنصر جو جائزو.حياتياتي سائنس.فارماسسٽ.143، 112119 (2021).
ڪاٽو، آءِ.، ژانگ، جي ۽ سن، جي. بئڪٽيريل-وائرل رابطي ۾ انساني orodigestive ۽ عورتن جي جينياتي پٿرن جي ڪينسر: ايپيڊميولوجيڪ ۽ ليبارٽري ثبوت جو خلاصو. ڪاٽو، آءِ.، ژانگ، جي ۽ سن، جي. بئڪٽيريل-وائرل رابطي ۾ انساني orodigestive ۽ عورتن جي جينياتي پٿرن جي ڪينسر: ايپيڊميولوجيڪ ۽ ليبارٽري ثبوت جو خلاصو.Kato I.، Zhang J. ۽ Sun J. انسان جي پيٽ جي ڪينسر ۾ بيڪٽيريل-وائرل رابطي ۽ عورتن جي جينياتي ٽريڪ: ايپيڊميولوجيڪل ۽ ليبارٽري ڊيٽا جو خلاصو. Kato, I., Zhang, J. & Sun, J. 人类口腔消化道癌和女性生殖道癌中的细菌-病毒相互作用：毒相互作用：浒相互作用据总结. ڪيٽو، آءِ.، ژانگ، جي ۽ سن، جي. بيڪٽيريو-وائرل رابطي ۾ انساني زباني گفا جي هضم ۽ عورتن جي پيدائش واري رستي: مشهور بيماري سائنس ۽ ليبارٽري ثبوت جو خلاصو.Kato I.، Zhang J. ۽ Sun J. انسان جي پيٽ جي ڪينسر ۽ عورتن جي جينياتي ڪينسر ۾ بيڪٽيريا-وائرل رابطي: ايپيڊميولوجيڪل ۽ ليبارٽري ڊيٽا جو خلاصو.ڪينسر 14، 425 (2022).
Magon, KL & Parish, JL انفيڪشن کان ڪينسر تائين: ڪيئن ڊي اين اي ٽومر وائرس ميزبان سيل سينٽرل ڪاربان ۽ لپڊ ميٽابولزم کي تبديل ڪن ٿا. Magon, KL & Parish, JL انفيڪشن کان ڪينسر تائين: ڪيئن ڊي اين اي ٽومر وائرس ميزبان سيل سينٽرل ڪاربان ۽ لپڊ ميٽابولزم کي تبديل ڪن ٿا.مهون، KL ۽ پارش، جي ايل فائر انفيڪشن کي ڪينسر: ڪيئن ڊي اين اي تي ٻڌل ٽامي وائرس ميزبان سيل سينٽرل ڪاربان ۽ لپڊ ميٽابولزم کي تبديل ڪن ٿا. Magon, KL & Parish, JL 从感染到癌症：DNA 肿瘤病毒如何改变宿主细胞的中心碳和脂质代谢. Magon, KL & Parish, JL انفيڪشن کان ڪينسر تائين: ڪيئن ڊي اين اي ٽومر وائرس ميزبان سيل سينٽرل ڪاربان ۽ لپڊ ميٽابولزم کي تبديل ڪندا آهن.مهون، KL ۽ پارش، جي ايل ڪينسر کي انفيڪشن کي باهه ڏئي ٿو: ڪيئن ڊي اين اي ٽومر وائرس ميزبان سيلز ۾ مرڪزي ڪاربان ۽ لپڊ ميٽابولزم کي تبديل ڪري ٿو.کليل حياتيات.11، 210004 (2021).
Correia da Costa, JM et al.schistosomes ۽ جگر جي ڦڦڙن جي ڪيٽيڪول ايسٽروجن ۽ هيلمينٿ سان لاڳاپيل ڪينسر.سامهون.اندر گرم.5، 444 (2014).