Nature.com گهمڻ لاءِ توهان جي مهرباني.برائوزر جو نسخو توهان استعمال ڪري رهيا آهيو محدود CSS سپورٽ آهي.بهترين تجربي لاءِ، اسان سفارش ڪريون ٿا ته توهان هڪ اپڊيٽ ٿيل برائوزر استعمال ڪريو (يا انٽرنيٽ ايڪسپلورر ۾ مطابقت واري موڊ کي بند ڪريو).ساڳئي وقت ۾، مسلسل حمايت کي يقيني بڻائڻ لاء، اسان سائيٽ کي بغير اسٽائل ۽ جاوا اسڪرپٽ پيش ڪنداسين.
پلمونري سسٽڪ فائبروسس جي علاج لاءِ جين ویکٹر کي لازمي طور تي ھدف ڪرڻ واري ايئر ويز کي ھدف ڪيو وڃي ٿو، ڇو ته پردي جي ڦڦڙن جي منتقلي جو ڪو به علاج وارو اثر نه آھي.وائرل ٽرانسپشن جي ڪارڪردگي سڌو سنئون ڪيريئر جي رهائش واري وقت سان لاڳاپيل آهي.جڏهن ته، ترسيل سيال جهڙوڪ جين ڪيريئرز قدرتي طور اليوولي ۾ ڦهلجي ويندا آهن سانس دوران، ۽ ڪنهن به شڪل جا علاج وارا ذرات تيزيء سان ميوڪوسيلي ٽرانسپورٽ ذريعي هٽايا ويندا آهن.تنفس جي رستي ۾ جين ڪيريئر جي رهائش واري وقت کي وڌائڻ ضروري آهي پر حاصل ڪرڻ ڏکيو آهي.ڪيريئر سان ٺهڪندڙ مقناطيسي ذرات جيڪي تنفس جي رستي جي مٿاڇري ڏانهن هدايت ڪري سگھجن ٿيون علائقائي ٽارگيٽنگ کي بهتر بڻائي سگهن ٿيون.ويوو اميجنگ ۾ مسئلن جي ڪري، لاڳو ٿيل مقناطيسي فيلڊ جي موجودگي ۾ ايئر وي جي مٿاڇري تي اهڙن ننڍڙن مقناطيسي ذرات جي رويي کي خراب طور تي سمجهي نه سگهيو آهي.هن مطالعي جو مقصد اهو هو ته ويوو ۾ مقناطيسي ذرڙن جي هڪ سيريز جي حرڪت کي وييو ۾ ڏسڻ لاءِ synchrotron اميجنگ استعمال ڪرڻ هو ته جيئن بيشمار چوڪن جي پيچيدگين ۾ متحرڪ ۽ نمونن جو مطالعو ڪرڻ لاءِ vivo ۾ واحد ۽ بلڪ ذرڙن جي رويي جي رفتار.اسان وري اهو به اندازو لڳايو ته ڇا مقناطيسي فيلڊ جي موجودگي ۾ lentiviral مقناطيسي ذرات جي ترسيل rat trachea ۾ ٽرانزيڪشن جي ڪارڪردگي کي وڌائي سگهندي.Synchrotron X-ray Imaging ڏيکاري ٿي مقناطيسي ذرڙن جو رويو اسٽيشنري ۽ حرڪت ڪندڙ مقناطيسي شعبن ۾ vitro ۽ vivo ۾.مقناطيس کي استعمال ڪندي زنده ايئر ويز جي مٿاڇري تي ذرات کي آساني سان ڇڪي نه ٿو سگهجي، پر ٽرانسپورٽ جي دوران، ذخيرو ڏسڻ جي ميدان ۾ مرڪوز ڪيو ويندو آهي، جتي مقناطيسي ميدان مضبوط آهي.ٽرانزيڪشن ڪارڪردگي پڻ ڇهه ڀيرا وڌي وئي هئي جڏهن lentiviral مقناطيسي ذرات کي مقناطيسي فيلڊ جي موجودگي ۾ پهچايو ويو.گڏ ڪيل، اهي نتيجا پيش ڪن ٿا ته lentiviral مقناطيسي ذرڙا ۽ مقناطيسي شعبا قيمتي طريقا ٿي سگهن ٿا جين ویکٹر ٽارگيٽنگ ۽ ٽرانزيڪشن جي سطح کي بهتر ڪرڻ لاءِ وييو ۾ conductive airways ۾.
سسٽڪ فبروسس (سي ايف) هڪ واحد جين ۾ تبديلين جي ڪري پيدا ٿئي ٿو جنهن کي CF ٽرانسميمبرن ڪنڊڪٽنس ريگيوليٽر (CFTR) سڏيو ويندو آهي.CFTR پروٽين هڪ آئن چينل آهي جيڪو سڄي جسم ۾ ڪيترن ئي اپيٿيليل سيلز ۾ موجود آهي، بشمول ايئر ويز، سسٽڪ فائبروسس جي روگجنن ۾ هڪ اهم سائيٽ.CFTR ۾ خرابيون غير معمولي پاڻي جي نقل و حمل، ايئر وي جي مٿاڇري جي پاڻي جي گھٽتائي، ۽ ايئر وي جي مٿاڇري جي فلوئڊ پرت (ASL) جي کوٽائي جي ڪري ٿي.اهو سانسيل ذرات ۽ پيٿوجنز جي ايئر ويز کي صاف ڪرڻ لاءِ ميوڪوڪيلي ٽرانسپورٽ (MCT) سسٽم جي صلاحيت کي پڻ متاثر ڪري ٿو.اسان جو مقصد هڪ lentiviral (LV) جين ٿراپي کي ترقي ڪرڻ آهي CFTR جين جي صحيح ڪاپي پهچائڻ ۽ ASL، MCT، ۽ ڦڦڙن جي صحت کي بهتر ڪرڻ، ۽ نئين ٽيڪنالاجي کي ترقي جاري رکڻ لاء جيڪي انهن پيٽرولن کي vivo1 ۾ ماپ ڪري سگهن ٿيون.
LV ویکٹر سسٽڪ فائبروسس جين ٿراپي لاءِ معروف اميدوارن مان هڪ آهن، خاص طور تي ڇاڪاڻ ته اهي مستقل طور تي علاج واري جين کي ايئر وي بيسل سيلز (ايئر وي اسٽيم سيلز) ۾ ضم ڪري سگهن ٿا.اهو ضروري آهي ڇاڪاڻ ته اهي سسٽڪ فائبروسس سان لاڳاپيل فنڪشنل جين-صحيح ٿيل ايئر وي جي مٿاڇري جي سيلن ۾ فرق ڪندي عام هائيڊريشن ۽ بلغم جي صافي کي بحال ڪري سگهن ٿا، جنهن جي نتيجي ۾ زندگي گذارڻ وارا فائدا آهن.LV ویکٹر لازمي طور تي هلائيندڙ ايئر ويز جي خلاف هدايت ڪئي وڃي، ڇاڪاڻ ته هي اهو آهي جتي CF ۾ ڦڦڙن جي شموليت شروع ٿئي ٿي.ویکٹر جي ترسيل ڦڦڙن جي اونهائي ۾ اليوولر ٽرانزيڪشن جي نتيجي ۾ ٿي سگهي ٿي، پر اهو سسٽڪ فائبروسس ۾ ڪو به علاج وارو اثر نه آهي.تنهن هوندي به، fluids جهڙوڪ جين ڪيريئر قدرتي طور تي اليوولي ۾ لڏپلاڻ ڪن ٿا جڏهن ٻار جي پيدائش کان پوء سانس اندر اندر اندر اندر اندر داخل ٿئي ٿو 3,4 ۽ علاج وارا ذرات تيزيء سان زباني غار ۾ MCTs ذريعي ڪڍيا ويندا آهن.LV ٽرانزيڪشن جي ڪارڪردگيءَ جو واسطو سڌي طرح ان وقت سان آهي جيڪو ویکٹر ٽارگيٽ سيلز جي ويجهو رهي ٿو ته جيئن سيلولر اپٽيڪ کي اجازت ڏئي سگهي - ”رهائش جو وقت“ 5 جيڪو آسانيءَ سان مختصر ڪيو وڃي ٿو عام علائقائي هوا جي وهڪري سان گڏو گڏ بلغم ۽ MCT ذرات جي هموار ٿيل اپٽيڪ.سسٽڪ فبروسس لاءِ، ايئر ويز ۾ LV رهائش واري وقت کي ڊگھو ڪرڻ جي صلاحيت هن علائقي ۾ اعليٰ سطح جي منتقلي حاصل ڪرڻ لاءِ اهم آهي، پر اڃا تائين مشڪل آهي.
هن رڪاوٽ کي ختم ڪرڻ لاءِ، اسان تجويز ڪريون ٿا ته LV مقناطيسي ذرڙا (MPs) ٻن مڪمل طريقن سان مدد ڪري سگھن ٿا.پهرين، انهن کي هڪ مقناطيس ذريعي هوائي رستو جي مٿاڇري تي هدايت ڪري سگهجي ٿو ته جيئن ٽارگيٽنگ کي بهتر بڻائي سگهجي ۽ جين ڪيريئر ذرات کي هوا جي رستي جي صحيح حصي ۾ رهڻ ۾ مدد ملي.۽ ASL) سيل جي پرت ۾ منتقل ٿي وڃن ٿا 6. ايم پي وڏي پيماني تي ٽارگيٽڊ ڊرگ ڊليوري گاڏين جي طور تي استعمال ٿيندا آهن جڏهن اهي اينٽي باڊيز، ڪيموٿراپي دوائن، يا ٻين ننڍڙن ماليڪيولن سان جڙيل هوندا آهن جيڪي سيل جھلي سان جڙيل هوندا آهن يا انهن جي لاڳاپيل سيل جي سطح جي ريڪٽرز سان جڙيل هوندا آهن ۽ ٽومر سائيٽن تي جمع ٿيندا آهن. جامد بجلي جي موجودگي.ڪينسر جي علاج لاءِ مقناطيسي شعبا 7. ٻيا ”هائيپرٿرمڪ“ طريقا آهن جن جو مقصد ٽمور سيلن کي مارڻ آهي ايم پيز کي گرم ڪرڻ سان جڏهن مقناطيسي شعبن کي اوندهه ڪيو وڃي.مقناطيسي منتقلي جو اصول، جنهن ۾ هڪ مقناطيسي فيلڊ ڊي اين اي جي سيلز ۾ منتقلي کي وڌائڻ لاء ٽرانسفڪشن ايجنٽ جي طور تي استعمال ڪيو ويندو آهي، عام طور تي ويٽرو ۾ استعمال ڪيو ويندو آهي غير وائرل ۽ وائرل جين ویکٹر جي هڪ رينج کي استعمال ڪندي مشڪل کان منتقل ڪرڻ واري سيل لائنن لاءِ. ..هڪ جامد مقناطيسي فيلڊ جي موجودگي ۾ انساني برونشيل ايپيٿيليم جي سيل لائن ۾ ويٽرو ۾ LV MP جي پهچائڻ سان LV مقناطيس ٽرانسفيڪشن جي ڪارڪردگي قائم ڪئي وئي، صرف LV ویکٹر جي مقابلي ۾ 186 ڀيرا منتقلي جي ڪارڪردگي وڌائي.LV MT پڻ سسٽڪ فائبروسس جي هڪ ان ويٽرو ماڊل تي لاڳو ڪيو ويو آهي، جتي مقناطيسي ٽرانسفيشن ايئر مائع انٽرفيس ڪلچرز ۾ LV ٽرانسڪشن کي 20 جي فيڪٽر ذريعي سسٽڪ فائبروسس اسپتم 10 جي موجودگي ۾ وڌايو.بهرحال، vivo organ magnetotransfection ۾ نسبتا ٿورو ڌيان ڏنو ويو آهي ۽ صرف چند جانورن جي مطالعي ۾ جائزو ورتو ويو آهي 11,12,13,14,15، خاص طور تي ڦڦڙن ۾ 16,17.بهرحال، سسٽڪ فائبروسس ۾ ڦڦڙن جي علاج ۾ مقناطيسي منتقلي جا امڪان واضح آهن.Tan et al.(2020) چيو ويو آهي ته "مقناطيسي نانو ذرات جي موثر پلمونري پهچائڻ تي هڪ تصديق جو مطالعو مستقبل جي CFTR سانس جي حڪمت عملي جي لاءِ رستو هموار ڪندو ته جيئن سسٽڪ فائبروسس سان مريضن ۾ ڪلينڪ نتيجا بهتر ٿي سگهن"6.
لاڳو ٿيل مقناطيسي فيلڊ جي موجودگي ۾ سانس جي رستي جي مٿاڇري تي ننڍڙن مقناطيسي ذرات جي رويي کي ڏسڻ ۽ مطالعو ڪرڻ ڏکيو آهي، ۽ ان ڪري انهن کي خراب سمجهي سگهجي ٿو.ٻين مطالعي ۾، اسان ترقي ڪئي آهي Synchrotron Propagation Based Fase Contrast X-ray Imaging (PB-PCXI) طريقو غير ناگوار تصويرن لاءِ ۽ منٽ جي مقدار ۾ ويوو تبديلين ۾ ASL18 جي ​​کوٽائي ۽ MCT19 رويي ۾، 20 سڌو سنئون گيس چينل جي مٿاڇري جي هائيڊريشن کي ماپڻ لاءِ. ۽ هڪ ابتدائي اشارو علاج جي اثرائتي طور استعمال ڪيو ويندو آهي.ان کان علاوه، اسان جي MCT اسڪورنگ جو طريقو استعمال ڪري ٿو 10-35 µm قطر جا ذرڙا جيڪي ايلومينا يا هاءِ ريفريڪٽو انڊيڪس گلاس مان ٺهيل MCT مارڪرز PB-PCXI21 سان نظر اچن ٿا.ٻئي طريقا ذرڙن جي قسمن جي رينج لاءِ موزون آهن، جن ۾ ايم پيز شامل آهن.
اعلي فضائي ۽ عارضي ريزوليوشن جي ڪري، اسان جي PB-PCXI-based ASL ۽ MCT Assays ويوو ۾ واحد ۽ بلڪ ذرڙن جي متحرڪ ۽ رويي جي نمونن جي مطالعي لاءِ موزون آهن ته جيئن اسان کي ايم پي جين پهچائڻ جي طريقن کي سمجهڻ ۽ بهتر ڪرڻ ۾ مدد ملي.جيڪو طريقو اسان هتي استعمال ڪريون ٿا اهو اسان جي مطالعي تي مبني آهي SPring-8 BL20B2 بيم لائن استعمال ڪندي، جنهن ۾ اسان هڪ ڊمي ویکٹر جي هڪ دوز کي چوهڙن جي نڪ ۽ پلمونري ايئر ويز ۾ پهچائڻ کان پوءِ سيال جي حرڪت جو تصور ڪيو آهي ته جيئن اسان جي هيٽروجنيئس جين اظهار جي نمونن کي بيان ڪرڻ ۾ مدد ملي سگهي. اسان جي جين ۾.جانورن جو مطالعو 3.4 جي ڪيريئر دوز سان.
هن مطالعي جو مقصد هو PB-PCXI synchrotron استعمال ڪرڻ لاء vivo تحريڪن ۾ ايم پي جي هڪ سيريز جي زندگين چوڪن جي پيچيدگي ۾ ڏسڻ لاء.اهي PB-PCXI اميجنگ اڀياس ايم پي سيريز، مقناطيسي فيلڊ جي طاقت، ۽ ايم پي تحريڪ تي اثر انداز ڪرڻ لاء مقام کي جانچڻ لاء ٺهيل هئا.اسان فرض ڪيو ته هڪ خارجي مقناطيسي ميدان فراهم ڪيل ايم ايف کي رهڻ يا ٽارگيٽ واري علائقي ڏانهن منتقل ڪرڻ ۾ مدد ڪندو.انهن مطالعي اسان کي مقناطيسي ترتيبن جو تعين ڪرڻ جي اجازت پڻ ڏني آهي جيڪا جمع ٿيڻ کان پوء trachea ۾ ڇڏيل ذرات جي مقدار کي وڌائي ٿي.مطالعي جي هڪ ٻي سيريز ۾، اسان مقصد اهو آهي ته هن بهترين ترتيب کي استعمال ڪرڻ لاء ٽرانزيڪشن جي نموني کي ظاهر ڪرڻ جي نتيجي ۾ LV-MPs جي vivo پهچائڻ جي نتيجي ۾ چوٿون ايئر ويز تي، انهي فرض تي ته LV-MPs جي ترسيل ايئر وي جي ٽارگيٽ جي حوالي سان نتيجو ٿيندو. وڌايل LV ٽرانسپشن ڪارڪردگي ۾..
سڀني جانورن جا اڀياس ايڊيليڊ يونيورسٽي (M-2019-060 ۽ M-2020-022) ۽ SPring-8 Synchrotron Animal Ethics Committee پاران منظور ڪيل پروٽوڪول جي مطابق ڪيا ويا.تجربا ARRIVE جي سفارشن جي مطابق ڪيا ويا.
جاپان ۾ SPring-8 synchrotron تي BL20XU بيم لائن تي سڀ ايڪس-ري تصويرون ورتيون ويون آهن ساڳيو سيٽ اپ استعمال ڪندي جيئن اڳ بيان ڪيل 21,22.مختصر طور تي، تجرباتي باڪس synchrotron اسٽوريج انگن کان 245 ميٽر تي واقع هو.0.6 ميٽر جو هڪ نمونو کان ڊڪٽيٽر فاصلو استعمال ڪيو ويندو آهي ذرات جي تصويرن جي مطالعي لاءِ ۽ 0.3 ميٽر ويوو اميجنگ مطالعي لاءِ استعمال ڪيو ويندو آهي مرحلو برعڪس اثر پيدا ڪرڻ لاءِ.25 keV جي توانائي سان هڪ monochromatic شعاع استعمال ڪيو ويو.تصويرون هڪ اعلي ريزوليوشن X-ray ٽرانسڊيسر (SPring-8 BM3) استعمال ڪندي حاصل ڪيون ويون آهن هڪ sCMOS ڊيڪٽر سان.ٽرانسڊيوسر 10 µm ٿلهي اسڪينٽيليٽر (Gd3Al2Ga3O12) کي استعمال ڪندي ايڪس ريز کي نظر ايندڙ روشنيءَ ۾ بدلائي ٿو، جنهن کي پوءِ ×10 (NA 0.3) خوردبيني مقصد استعمال ڪندي sCMOS سينسر ڏانهن هدايت ڪئي وئي آهي.sCMOS ڊيڪٽر هڪ Orca-Flash4.0 (Hamamatsu Photonics, Japan) هو، جنهن جي آري سائيز 2048 × 2048 پکسلز ۽ خام پکسل جي سائيز 6.5 × 6.5 µm هئي.هي سيٽنگ 0.51 µm جي هڪ مؤثر آئوٽروپڪ پکسل سائيز ۽ تقريبن 1.1 mm × 1.1 mm جي ڏسڻ جو ميدان ڏئي ٿو.100 ms جي نمائش جي مدت کي ايئر ويز جي اندر ۽ ٻاهر مقناطيسي ذرات جي سگنل کان شور جي تناسب کي وڌائڻ لاء چونڊيو ويو، جڏهن ته سانس جي سبب موشن جي نمونن کي گھٽائڻ.vivo مطالعي ۾، ايڪس ري جي رستي ۾ ايڪس ري جي دوز کي محدود ڪرڻ لاء ايڪس ري جي بيم کي نمائش جي وچ ۾ بلاڪ ڪرڻ لاء هڪ تيز ايڪس ري شٽر رکيل هئي.
LV ميڊيا ڪنهن به SPring-8 PB-PCXI اميجنگ مطالعي ۾ استعمال نه ڪيو ويو ڇاڪاڻ ته BL20XU اميجنگ چيمبر بايو حفاظتي سطح 2 تصديق ٿيل نه آهي.ان جي بدران، اسان ٻن ڪمرشل وينڊرز مان چڱن خصوصيتن واري ايم پي ايز جي هڪ رينج کي چونڊيو آهي، جنهن ۾ سائيز، مواد، لوهه جي توجهه، ۽ ايپليڪيشنن جي هڪ رينج شامل آهي، - پهرين اهو سمجهڻ لاءِ ته ڪيئن مقناطيسي شعبن شيشي جي ڪيپليري ۾ ايم پيز جي حرڪت کي متاثر ڪن ٿا، ۽ پوءِ زنده هوا.مٿاڇري.ايم پي جي ماپ 0.25 کان 18 µm تائين مختلف آهي ۽ مختلف مواد مان ٺهيل آهي (ٽيبل 1 ڏسو)، پر هر نموني جي جوڙجڪ، ايم پي ۾ مقناطيسي ذرات جي ماپ سميت، نامعلوم ناهي.اسان جي وسيع MCT مطالعي جي بنياد تي 19، 20، 21، 23، 24، اسان اميد رکون ٿا ته ايم پيز کي 5 µm تائين tracheal airway جي مٿاڇري تي ڏسي سگھجي ٿو، مثال طور، MP تحريڪ جي بهتر نمائش ڏسڻ لاء مسلسل فريم کي گھٽائڻ سان.0.25 µm جو هڪ واحد ايم پي ايجنگ ڊيوائس جي ريزوليوشن کان ننڍو هوندو آهي، پر PB-PCXI کي اميد آهي ته انهن جي مقداري برعڪس ۽ مٿاڇري جي مائع جي حرڪت جو پتو پوي ٿو جنهن تي اهي جمع ٿيڻ کان پوءِ جمع ڪيا ويندا آهن.
ٽيبل ۾ هر ايم پي لاء نموني.1 تيار ڪيو ويو 20 μl گلاس ڪيپليئرز (ڊرمنڊ مائڪروڪپس، PA، USA) ۾ 0.63 ملي ميٽر جي اندروني قطر سان.Corpuscular ذرات پاڻيء ۾ موجود آهن، جڏهن ته CombiMag ذرات ٺاهيندڙن جي ملڪيت جي مائع ۾ موجود آهن.هر ٽيوب اڌ مائع سان ڀريل آهي (تقريبن 11 µl) ۽ نموني هولڊر تي رکيل آهي (ڏسو شڪل 1).شيشي جي ڪيپليئرز کي اسٽيج تي افقي طور تي اميجنگ چيمبر ۾، ترتيب سان، ۽ مائع جي ڪنارن تي رکيل هئا.ھڪڙو 19 ملي ميٽر قطر (28 ملي ميٽر ڊگھو) نڪيل شيل مقناطيس ناياب زمين، نيوڊيميم، لوھ ۽ بورون (NdFeB) (N35، cat. no. LM1652، Jaycar Electronics، Australia) مان ٺهيل آھي 1.17 T جي ريمننس سان. حاصل ڪرڻ لاءِ الڳ منتقلي ٽيبل ريموٽ طور تي رينڊرنگ دوران پنھنجي پوزيشن کي تبديل ڪريو.ايڪس-ري تصويرن جي شروعات ٿيندي آهي جڏهن مقناطيس نموني کان تقريبا 30 ملي ميٽر مٿي رکيل آهي ۽ تصويرون 4 فريم في سيڪنڊ تي حاصل ڪيون وينديون آهن.تصويرن جي دوران، مقناطيس کي شيشي جي ڪيپيلري ٽيوب جي ويجهو آندو ويو (تقريبن 1 ملي ايم جي مفاصلي تي) ۽ پوءِ فيلڊ جي طاقت ۽ پوزيشن جي اثر کي جانچڻ لاءِ ٽيوب سان گڏ هليو ويو.
xy نموني جي ترجمي جي مرحلي تي شيشي جي ڪيپليئرز ۾ ايم پي نمونن تي مشتمل هڪ ان ويٽرو اميجنگ سيٽ اپ.ايڪس-ري شعاع جو رستو ڳاڙهي ڊاٽ ٿيل لڪير سان نشان لڳل آهي.
هڪ دفعو ايم پيز جي ويٽرو ويزيبلٽي قائم ڪئي وئي، انهن مان هڪ ذيلي سيٽ وييو ۾ آزمايو ويو جهنگلي قسم جي عورت ويسٽار البينو چوتن تي (~ 12 هفتا پراڻي، ~ 200 g).Medetomidine 0.24 mg/kg (Domitor®, Zenoaq, Japan), midazolam 3.2 mg/kg (Dormicum®, Astellas Pharma, Japan) ۽ butorphanol 4 mg/kg (Vetorphale®, Meiji Seika).Intraperitoneal انجيڪشن ذريعي فارما (جاپان) جي مرکب سان چوٽن کي بيشمار ڪيو ويو.انسٿيسيا کان پوءِ، انهن کي ٽريچيا جي چوڌاري فر کي هٽائي، انڊوٽريچيل ٽيوب (ET؛ 16 Ga intravenous cannula، Terumo BCT) داخل ڪري تصويرن جي لاءِ تيار ڪيو ويو، ۽ انهن کي گرمل بيگ تي مشتمل ڪسٽم ٺهيل تصويري پليٽ تي سوپائن پوزيشن ۾ متحرڪ ڪيو ويو. جسم جي حرارت کي برقرار رکڻ لاء.22. تصويرن واري پليٽ کي پوءِ تصوير 2a ۾ ڏيکاريل x-ray تصوير تي trachea کي افقي طور تي ترتيب ڏيڻ لاءِ تصويري خاني ۾ نموني اسٽيج سان ٿوري زاويي تي ڳنڍيو ويو.
(a) SPring-8 اميجنگ يونٽ ۾ vivo اميجنگ سيٽ اپ ۾، X-ray بيم جو رستو ڳاڙهي ڊاٽ ٿيل لائن سان نشان لڳل آهي.(b،c) ٽريچيل مقناطيس لوڪلائيزيشن کي ريموٽ طور تي ٻن آرٿوگونلي طور تي نصب ٿيل IP ڪئميرا استعمال ڪيو ويو.اسڪرين تي تصوير جي کاٻي پاسي تي، توھان ڏسي سگھوٿا تار لوپ سر کي رکيل آھي ۽ ET ٽيوب اندر نصب ٿيل ترسيل ڪينولا.
هڪ ريموٽ ڪنٽرول سرنج پمپ سسٽم (UMP2, World Precision Instruments, Sarasota, FL) هڪ 100 μl گلاس سرنج استعمال ڪندي PE10 ٽيوبنگ (0.61 mm OD، 0.28 mm ID) سان ڳنڍيو ويو 30 Ga سوئي استعمال ڪندي.ٽيوب کي نشان لڳايو ته پڪ ڪريو ته ٽپ صحيح پوزيشن ۾ آهي trachea ۾ جڏهن endotracheal ٽيوب داخل ڪيو وڃي.هڪ مائڪروپمپ استعمال ڪندي، سرنج پلنگر کي هٽايو ويو ۽ ٽيوب جي ٽپ کي پهچائڻ لاء ايم پي نموني ۾ غرق ڪيو ويو.لوڊ ٿيل ترسيل ٽيوب پوءِ انڊوٽريچيل ٽيوب ۾ داخل ڪيو ويو ، ٽپ کي اسان جي متوقع لاڳو ٿيل مقناطيسي فيلڊ جي مضبوط حصي تي رکي.تصوير جي حصول کي اسان جي Arduino-based ٽائمنگ باڪس سان ڳنڍيل سانس ڊيڪٽر استعمال ڪندي ڪنٽرول ڪيو ويو، ۽ سڀ سگنل (مثال طور، گرمي، تنفس، شٽر کولڻ / بند ڪرڻ، ۽ تصوير جي حصول) Powerlab ۽ LabChart (AD Instruments, Sydney, Australia) استعمال ڪندي رڪارڊ ڪيا ويا. 22 جڏهن اميجنگ جڏهن هائوسنگ دستياب نه هئي، ٻه IP ڪئميرا (Panasonic BB-SC382) هڪ ٻئي ڏانهن تقريبن 90 ° تي پوزيشن ۾ هئا ۽ تصويرن جي دوران trachea جي نسبت مقناطيس جي پوزيشن کي ڪنٽرول ڪرڻ لاء استعمال ڪيو ويو (شڪل 2b، c).حرڪت جي نمونن کي گهٽائڻ لاءِ، ٽرمينل تنفس جي وهڪري جي پليٽ جي دوران هڪ تصوير في سانس حاصل ڪئي وئي.
مقناطيس ٻئي اسٽيج سان جڙيل آهي، جيڪو شايد تصويري جسم جي ٻاهرئين پاسي تي واقع هجي.مقناطيس جي مختلف پوزيشنن ۽ ترتيبن کي آزمايو ويو، جنهن ۾ شامل آهن: لڳ ڀڳ 30° جي زاويه تي رکيل trachea جي مٿان (ترتيبات کي شڪل 2a ۽ 3a ۾ ڏيکاريل آهي)؛هڪ مقناطيس جانور جي مٿان ۽ ٻيو هيٺ، ڪشش لاءِ مقرر قطبن سان (شڪل 3b)., هڪ مقناطيس جانور جي مٿان ۽ هڪ هيٺان، قطبن سان ٺهڪندڙ (Figure 3c)، ۽ هڪ مقناطيس مٿي ۽ trachea ڏانهن عمودي (شڪل 3d).جانورن ۽ مقناطيس کي ترتيب ڏيڻ کان پوءِ ۽ ايم پي کي ٽيسٽ هيٺ سرنج پمپ ۾ لوڊ ڪرڻ کان پوءِ، تصويرن جي حاصلات تي 50 µl جو هڪ دوز 4 µl/sec جي شرح سان پهچايو.پوءِ مقناطيس تصويرن کي حاصل ڪرڻ جاري رکڻ دوران trachea سان گڏ يا اڳتي پوئتي منتقل ڪيو ويندو آهي.
ويوو اميجنگ ۾ مقناطيس جي ترتيب (a) هڪ مقناطيس trachea جي مٿان تقريبن 30 ° جي زاويه تي، (b) ٻه مقناطيس ڪشش لاءِ ترتيب ڏنل آهن، (c) ٻه مقناطيس ترتيب ڏنل آهن جن کي ڦيرائڻ لاءِ، (d) هڪ مقناطيس مٿي ۽ هڪ مقناطيس جي مٿان. tracheaمبصر وات کان هيٺ ڦڦڙن تائين trachea ذريعي ڏٺو ۽ X-ray شعاع چوهيءَ جي کاٻي پاسي کان لنگهي ساڄي پاسي کان ٻاهر نڪري ويو.مقناطيس يا ته هوائي رستي جي ڊگھائي سان گڏ يا کاٻي ۽ ساڄي طرف trachea جي مٿان X-ray شعاع جي طرف منتقل ڪيو ويندو آهي.
اسان پڻ تنفس ۽ دل جي شرح جي ميلاپ جي غير موجودگي ۾ ايئر ويز ۾ ذرات جي نمائش ۽ رويي کي طئي ڪرڻ جي ڪوشش ڪئي.تنهن ڪري، تصويرن جي مدت جي آخر ۾، جانورن کي انساني طور تي pentobarbital overdose (Somnopentyl، Pitman-Moore، واشنگٽن ڪراسنگ، USA؛ ~ 65 mg/kg ip) جي ڪري انساني طور تي ايٿانائيز ڪيو ويو.ڪجهه جانورن کي اميجنگ پليٽ فارم تي ڇڏي ويو، ۽ سانس ۽ دل جي ڌڙڪڻ جي بند ٿيڻ کان پوء، اميجنگ جي عمل کي بار بار ڪيو ويو، ايم پي جي اضافي خوراک شامل ڪئي وئي جيڪڏهن ڪو ايم پي ايئر وي جي مٿاڇري تي نظر نه آيو.
نتيجن واري تصويرن کي فليٽ ۽ اونداهي فيلڊ لاءِ درست ڪيو ويو ۽ پوءِ هڪ فلم ۾ گڏ ڪيو ويو (20 فريم في سيڪنڊ؛ 15-25 × عام رفتار تنفس جي شرح تي منحصر آهي) MATLAB (R2020a، The Mathworks) ۾ لکيل ڪسٽم اسڪرپٽ استعمال ڪندي.
ايل وي جين ویکٹر پهچائڻ تي سڀئي اڀياس ايڊيليڊ يونيورسٽي جي ليبارٽري اينيمل ريسرچ سينٽر ۾ ڪيا ويا ۽ مقصد SPring-8 تجربن جي نتيجن کي استعمال ڪرڻ جو اندازو لڳايو ته ڇا مقناطيسي فيلڊ جي موجودگي ۾ LV-MP پهچائڻ vivo ۾ جين جي منتقلي کي وڌائي سگهي ٿي. .MF ۽ مقناطيسي فيلڊ جي اثرات جو جائزو وٺڻ لاء، جانورن جي ٻن گروپن جو علاج ڪيو ويو: ھڪڙو گروپ LV MF سان مقناطيس جي جڳھ سان انجيل ڪيو ويو، ۽ ٻئي گروپ کي مقناطيس کان سواء LV MF سان ڪنٽرول گروپ سان انجيل ڪيو ويو.
LV جين ویکٹر ٺاهيا ويا آهن اڳ بيان ڪيل طريقا استعمال ڪندي 25, 26.LacZ ویکٹر هڪ ايٽمي لوڪلائيز بيٽا گليڪٽوسيڊيس جين جو اظهار ڪري ٿو جيڪو ايم پي ايس وي ڪنٽينٽيو پروموٽر (LV-LacZ) ذريعي هلائي ٿو، جيڪو منتقل ٿيل سيلن ۾ نيري رد عمل جي پيداوار پيدا ڪري ٿو، ڦڦڙن جي بافتن جي محاذن ۽ حصن تي نظر اچي ٿو.ٽائٽريشن سيل ڪلچرز ۾ ڪيو ويو دستي طور تي LacZ-مثبت سيلز جي تعداد کي ڳڻڻ لاءِ هيموڪيٽوميٽر استعمال ڪندي ٽائيٽر کي TU/ml ۾ ڳڻڻ لاءِ.ڪيريئرز -80 ° C تي cryopreserved آهن، استعمال ڪرڻ کان اڳ ڳريل آهن، ۽ CombiMag تي پابند آهن 1:1 ملاڻ سان ۽ ترسيل کان گهٽ ۾ گهٽ 30 منٽن تائين برف تي incubating.
نارمل اسپراگ ڊولي ريٽس (n = 3/گروپ، ~2-3 انسٿائيز ٿيل ip 0.4mg/kg medetomidine (Domitor, Ilium, Australia) ۽ 60mg/kg ketamine (Ilium, Australia) 1 مهيني جي عمر ۾) ip ) انجيڪشن ۽ غير جراحي زباني ڪينوليشن 16 Ga انٽرا وينس ڪينولا سان.ان ڳالهه کي يقيني بڻائڻ لاءِ ته tracheal airway tissue LV transduction حاصل ڪري ٿي، ان کي اسان جي اڳ بيان ڪيل ميڪيڪل پروربيشن پروٽوڪول استعمال ڪندي شرط لڳايو ويو هو جنهن ۾ tracheal airway جي مٿاڇري کي محوري طور تي تار جي ٽوڪري سان رگيو ويو هو (N-Circle, nitinol stone extractor without tip NTSE-022115, -UDH) ڪڪ ميڊيڪل، آمريڪا) 30 p28.ان کان پوء، اٽڪل 10 منٽن کان پوء بائيو حفاظتي ڪابينا ۾ خرابي کان پوء، LV-MP جي tracheal انتظاميه ڪئي وئي.
هن تجربي ۾ استعمال ٿيل مقناطيسي ميدان ساڳيءَ طرح ترتيب ڏني وئي هئي وييو ايڪس-ري مطالعي ۾، ساڳيءَ طرح مقناطيس trachea مٿان رکيل آهن ڊسٽليشن اسٽينٽ ڪلمپس (شڪل 4).LV-MP جو 50 µl حجم (2 x 25 µl aliquots) trachea (n = 3 جانورن) تائين پهچايو ويو جيل-ٽپ ٿيل پائپٽ استعمال ڪندي جيئن اڳ بيان ڪيو ويو آهي.ڪنٽرول گروپ (n = 3 جانور) هڪ مقناطيس جي استعمال کان سواء ساڳئي LV-MP حاصل ڪئي.انفيوژن جي مڪمل ٿيڻ کان پوء، ڪينولا کي ختم ڪيو ويندو آهي endotracheal tube مان ۽ جانور کي ختم ڪيو ويندو آهي.مقناطيس کي هٽائڻ کان پهريان 10 منٽن تائين جاء تي رهي ٿو.ميلوڪسيڪم (1 ml/kg) (Ilium, Australia) سان گڏ چورن کي ذليل طور تي ڊاس ڪيو ويو، بعد ۾ 1 mg/kg atipamazole hydrochloride (Antisedan, Zoetis, Australia) جي intraperitoneal انجيڪشن ذريعي انسٿيسيا واپس ورتو ويو.چوٿون گرم رکيا ويا ۽ مشاهدو ڪيو ويو جيستائين بيشمار جي مڪمل بحالي تائين.
LV-MP پهچائڻ جي ڊوائس هڪ حياتياتي حفاظت ڪابينا ۾.توهان ڏسي سگهو ٿا ته ET ٽيوب جو هلڪو گرين Luer-lock بازو وات مان نڪرندو آهي، ۽ تصوير ۾ ڏيکاريل جيل پائيپٽ ٽپ کي ET ٽيوب ذريعي trachea ۾ گهربل کوٽائي تائين داخل ڪيو ويندو آهي.
LV-MP انتظامي عمل جي هڪ هفتي کان پوء، جانورن کي انساني طور تي 100٪ CO2 جي سانس ذريعي قربان ڪيو ويو ۽ اسان جي معياري X-gal علاج استعمال ڪندي LacZ اظهار جو جائزو ورتو ويو.ٽي سڀ کان وڌيڪ caudal cartilage rings کي هٽايو ويو انهي کي يقيني بڻائڻ لاءِ ته ڪنهن به ميڪانياتي نقصان يا سيال برقرار رکڻ جي ڪري endotracheal tube placement جي تجزيي ۾ شامل نه ڪيو ويندو.تجزيو لاءِ ٻه اڌ حاصل ڪرڻ لاءِ ھر پيچري کي ڊگھي طرف ڪٽيو ويو ۽ ھڪڙي پيالي ۾ رکيل سلڪون ربر (Sylgard, Dow Inc) کي Minutien سوئي (فائن سائنس ٽولز) استعمال ڪندي لومينل سطح کي ڏسڻ لاءِ.منتقل ٿيل سيلز جي تقسيم ۽ ڪردار جي تصديق ڪئي وئي فرنٽل فوٽوگرافي ذريعي هڪ Nikon مائڪرو اسڪوپ (SMZ1500) استعمال ڪندي DigiLite ڪئميرا ۽ TCapture سافٽ ويئر (Tucsen Photonics، China).تصويرون 20x ميگنيفڪيشن تي حاصل ڪيون ويون (جنهن ۾ trachea جي پوري چوٽي لاءِ وڌ ۾ وڌ سيٽنگ شامل آهي)، trachea جي پوري ڊگھائي سان گڏ قدم بہ قدم ڏيکاريو ويو، هر تصوير جي وچ ۾ ڪافي اوورليپ مهيا ڪري ٿي ته جيئن تصويرن کي ”سٽي“ ڪيو وڃي.پوءِ هر پيچري مان تصويرن کي گڏيل تصويري ايڊيٽر ورزن 2.0.3 (Microsoft Research) استعمال ڪندي پلانر موشن الگورٿم استعمال ڪندي هڪ واحد جامع تصوير ۾ شامل ڪيو ويو. LacZ ايڪسپريس جي ايراضيءَ ۾ tracheal جامع تصويرن جي اندر اندر هر جانور مان هڪ خودڪار MATLAB اسڪرپٽ (R2020a، MathWorks) استعمال ڪيو ويو جيئن اڳ بيان ڪيو ويو 28، 0.35 < Hue < 0.58، Saturation > 0.15، ۽ Value < 0.7 استعمال ڪندي. LacZ ايڪسپريس جي ايراضيءَ ۾ tracheal جامع تصويرن جي اندر هر جانور مان هڪ خودڪار MATLAB اسڪرپٽ (R2020a، MathWorks) استعمال ڪندي مقدار ڪئي وئي جيئن اڳ بيان ڪيو ويو 28، سيٽنگون استعمال ڪندي 0.35 < Hue < 0.58، Saturation > 0.15، ۽ Value < 0.7. Площадь экспрессии LacZ в составных изображениях трахеи от каждого животного была количественно нария MATLAB (R2020a, MathWorks), как описано ранее28, с использованием настроек 0,35 <оттенок <0,58, насыщенность> 0,15 <зениченность ،7. LacZ ايڪسپريس جو علائقو هر جانور جي جامع پيچري جي تصويرن ۾ هڪ خودڪار MATLAB اسڪرپٽ (R2020a، MathWorks) استعمال ڪندي مقدار جي حساب سان ڪيو ويو جيئن اڳ بيان ڪيو ويو 28 جي سيٽنگون استعمال ڪندي 0.350.15 ۽ قدر <0.7.如前所述,使用自动MATLAB 脚本（R2020a,MathWorks）对来自每只动物的气管复合图像茟茡复合图像茟臡只动化，使用0.35 < 色调< 0.58, 饱和度> 0.15 和值< 0.7 的设置.如 前所 述 ， 自动 自动 Matlab 脚本 （r2020a ， Mathworks使用 使用 使用 0.35 <色调 <0.58 、> 0.15 和值 <0.7 的。 ….. .. .. . . . . . . Области экспрессии LacZ на составных изображениях трахеи каждого животного количественно с использованием R2020a, MathWorks), как описано ранее, с использованием настроек 0,35 <оттенок <0,58, насыщенность> 0,15 и значение <0,7 . LacZ اظهار جا علائقا هر جانور جي trachea جي جامع تصويرن تي هڪ خودڪار MATLAB اسڪرپٽ (R2020a، MathWorks) استعمال ڪندي مقدار جي حساب سان ڪئي وئي جيئن اڳ ۾ بيان ڪيل سيٽنگون 0.35 < hue < 0.58، saturation > 0.15 ۽ قدر < 0.7.GIMP v2.10.24 ۾ ٽشوز جي شڪلن کي ٽريڪ ڪرڻ سان، هڪ ماسڪ دستي طور تي ٺاهي وئي هر جامع تصوير لاءِ ٽشو ايريا کي سڃاڻڻ ۽ پيچيدگي واري ٽشو کان ٻاهر ڪنهن به غلط سڃاڻپ کي روڪڻ لاءِ.هر جانور جي سڀني جامع تصويرن مان داغ ٿيل علائقن کي گڏ ڪيو ويو ته ان جانور لاءِ کل داغ واري علائقي کي ڏيو.رنگ ٿيل علائقو وري ماسڪ جي ڪل ايراضيءَ سان ورهايو ويو ته جيئن عام علائقو حاصل ڪيو وڃي.
هر پيچرا پيرافين ۾ شامل ڪيو ويو ۽ سيڪشن 5 µm موٽو.سيڪشن کي 5 منٽن لاءِ غير جانبدار تيز ڳاڙهي رنگ سان مقابلو ڪيو ويو ۽ تصويرون هڪ Nikon Eclipse E400 مائڪرو اسڪوپ، DS-Fi3 ڪئميرا ۽ NIS عنصر ڪيپچر سافٽ ويئر (ورژن 5.20.00) استعمال ڪندي حاصل ڪيون ويون.
سڀ شمارياتي تجزيا GraphPad Prism v9 (GraphPad Software, Inc.) ۾ ڪيا ويا.شمارياتي اهميت مقرر ڪئي وئي پي ≤ 0.05 تي.Shapiro-Wilk ٽيسٽ جي استعمال سان معمولي جانچ ڪئي وئي ۽ LacZ اسٽيننگ ۾ اختلافن جو جائزو ورتو ويو اڻپڙيل ٽي-ٽيسٽ استعمال ڪندي.
جدول 1 ۾ بيان ڪيل ڇهن ايم پيز کي PCXI پاران جانچيو ويو، ۽ visibility جدول 2 ۾ بيان ڪئي وئي آهي. ٻه پولسٽريئر ايم پي (MP1 ۽ MP2؛ 18 µm ۽ 0.25 µm، ترتيب سان) PCXI پاران نظر نه آيا، پر باقي نمونن جي سڃاڻپ ٿي سگهي ٿي. (مثال 5 ۾ ڏيکاريل آهن).MP3 ۽ MP4 ڪمزور طور تي نظر اچن ٿا (10-15% Fe3O4؛ 0.25 µm ۽ 0.9 µm، ترتيب سان).جيتوڻيڪ MP5 (98% Fe3O4؛ 0.25 µm) ۾ ڪجھ ننڍا ننڍا ذرڙا آزمايا ويا، پر اھو سڀ کان وڌيڪ واضح ھو.CombiMag MP6 پراڊڪٽ کي فرق ڪرڻ ڏکيو آهي.سڀني صورتن ۾، MFs کي ڳولڻ جي اسان جي صلاحيت تمام گهڻو بهتر ٿي وئي مقناطيس کي اڳتي وڌڻ سان اڳتي وڌڻ سان متوازي ڪيپيلري ڏانهن.جيئن ته مقناطيس ڪيپيلري کان پري ٿي ويا، ذرڙا ڊگھي زنجيرن ۾ بند ڪيا ويا، پر جيئن جيئن مقناطيس ويجهو آيا ۽ مقناطيسي فيلڊ جي قوت وڌندي وئي، تيئن جيئن ذرڙا ڪيپيلري جي مٿئين مٿاڇري ڏانهن لڏي ويا ته ذرڙن جي زنجير ننڍي ٿيندي وئي (ڏسو ضمني وڊيو S1 : MP4)، سطح تي ذرات جي کثافت کي وڌايو.ان جي ابتڙ، جڏهن مقناطيس کي ڪيپيلري مان هٽايو ويندو آهي، فيلڊ جي طاقت گهٽجي ويندي آهي ۽ ايم پيز ڪيپيلري جي مٿئين مٿاڇري کان ڊگھي زنجيرن ۾ ٻيهر ترتيب ڏين ٿا (ڏسو ضمني وڊيو S2: MP4).مقناطيس جي حرڪت بند ٿيڻ کان پوءِ، ذرات برابري واري پوزيشن تي پهچڻ کان پوءِ ڪجهه وقت تائين حرڪت ڪندا رهندا آهن.جيئن ته ايم پي ڪيپيلري جي مٿئين مٿاڇري جي طرف ۽ پري منتقل ٿئي ٿي، مقناطيسي ذرات مائع ذريعي ملبي کي ڇڪيندا آهن.
PCXI جي تحت ايم پي جي نمائش نموني جي وچ ۾ بلڪل مختلف آهي.(a) MP3، (b) MP4، (c) MP5 ۽ (d) MP6.هتي ڏيکاريل سڀئي تصويرون هڪ مقناطيس سان ورتيون ويون آهن لڳ ڀڳ 10 ملي ميٽر سڌي طرح ڪيپيلري کان مٿي.ظاهري وڏا حلقا ڪيپليئرز ۾ ڦاٿل هوا جا بلبل آهن، واضح طور تي اسٽيج جي برعڪس تصوير جي ڪارو ۽ اڇي ڪنڊ جون خاصيتون ڏيکاريل آهن.ڳاڙھو دٻو اشارو وڌائي ٿو جيڪو برعڪس وڌائي ٿو.نوٽ ڪريو ته سڀني انگن اکرن ۾ مقناطيس سرڪٽ جا قطر ماپڻ لاءِ نه آهن ۽ ڏيکاريل کان تقريبن 100 ڀيرا وڏا آهن.
جيئن مقناطيس ڪيپيلري جي چوٽيءَ سان کاٻي ۽ ساڄي طرف ھلندو آھي، تيئن ايم پي اسٽرنگ جو زاويو مقناطيس سان ترتيب ڏيڻ لاءِ تبديل ٿي ويندو آھي (ڏسو شڪل 6)، اھڙيءَ طرح مقناطيسي فيلڊ لائينن کي بيان ڪندي.MP3-5 لاءِ، chord جي حد تائين پهچڻ کان پوءِ، ذرات ڪيپيلري جي مٿئين مٿاڇري سان ڇڪي ويندا آهن.ان جي نتيجي ۾ اڪثر ايم پي ايز وڏن گروپن ۾ گڏ ٿي ويندا آهن جتي مقناطيسي ميدان تمام مضبوط هوندو آهي (ڏسو ضمني وڊيو S3: MP5).اهو پڻ خاص طور تي واضح ٿئي ٿو جڏهن تصويري ڪيپيلري جي آخر جي ويجهو آهي، جيڪا ايم پي کي گڏ ڪرڻ ۽ مائع-ايئر انٽرفيس تي ڌيان ڏيڻ جو سبب بڻائيندو آهي.MP6 ۾ موجود ذرات، جن کي MP3-5 جي ڀيٽ ۾ فرق ڪرڻ ڏکيو هو، اهي نه ڇڪيندا هئا جڏهن مقناطيس ڪيپيلري سان گڏ هليو ويو، پر MP تارون الڳ ٿي ويون، ذرات کي نظر ۾ ڇڏي (ڏسو ضمني وڊيو S4: MP6).ڪجهه حالتن ۾، جڏهن لاڳو ٿيل مقناطيسي فيلڊ کي گھٽائي وئي مقناطيس کي تصويري سائيٽ کان ڊگھي فاصلي تي منتقل ڪيو ويو، باقي باقي ايم پيز سست رفتار سان ٽيوب جي هيٺئين سطح تي ڪشش ثقل جي ذريعي، تار ۾ باقي رهي (ڏسو ضمني وڊيو S5: MP3) .
ايم پي اسٽرنگ جو زاويو تبديل ٿئي ٿو جيئن مقناطيس ڪيپيلري جي مٿان ساڄي طرف منتقل ٿئي ٿو.(a) MP3، (b) MP4، (c) MP5 ۽ (d) MP6.ڳاڙھو دٻو اشارو وڌائي ٿو جيڪو برعڪس وڌائي ٿو.مهرباني ڪري نوٽ ڪريو ته اضافي وڊيوز معلوماتي مقصدن لاءِ آهن جيئن اهي ظاهر ڪن ٿيون اهم ذرات جي جوڙجڪ ۽ متحرڪ معلومات جيڪي انهن جامد تصويرن ۾ تصور نه ٿي ڪري سگهجن.
اسان جا تجربا ڏيکاريا ويا آهن ته مقناطيس کي پوئتي ۽ اڳتي وڌڻ سان trachea سان گڏ وييو ۾ پيچيده حرڪت جي تناظر ۾ ايم ايف جي تصور کي آسان بڻائي ٿو.ڪو به وييو ٽيسٽ نه ڪيو ويو ڇاڪاڻ ته پولسٽريئر موتي (MP1 ۽ MP2) ڪيپيلري ۾ نظر نه ايندا هئا.باقي چئن MFs مان هر هڪ کي وييو ۾ آزمايو ويو مقناطيس جي ڊگھي محور سان trachea مٿان لڳ ڀڳ 30° جي زاويي تي عمودي (ڏسو شڪل 2b ۽ 3a)، جيئن ته ان جي نتيجي ۾ MF زنجير ڊگھي ٿي ۽ وڌيڪ اثرائتي هئي. مقناطيس جي ڀيٽ ۾..تشڪيل ختم ڪئي وئي.ايم پي 3، ايم پي 4 ۽ ايم پي 6 ڪنهن به جيئري جانورن جي پيچري ۾ نه مليا آهن.جڏهن جانورن کي انسانيت سان مارڻ کان پوءِ چوهڙن جي تنفس جي رستي کي ڏسڻ ۾، ذرات پوشيده رهجي ويا جڏهن ته سرنج پمپ استعمال ڪندي اضافي حجم شامل ڪيو ويو.ايم پي 5 ۾ سڀ کان وڌيڪ لوهه آڪسائيڊ مواد هو ۽ اهو صرف نظر ايندڙ ذرو هو، تنهن ڪري اهو استعمال ڪيو ويو وييو ۾ ايم پي رويي جي تشخيص ۽ خاصيت ڪرڻ لاء.
MF داخل ڪرڻ دوران trachea مٿان مقناطيس جي رکڻ جي نتيجي ۾ ڪيترائي، پر سڀ نه، MFs ڏسڻ جي ميدان ۾ مرڪوز ٿي رهيا آهن.ذرڙن جي پيچيدگين جي داخل ٿيڻ کي انساني طور تي ايٿانائيز ٿيل جانورن ۾ بهترين طور تي ڏٺو ويندو آهي.شڪل 7 ۽ ضمني وڊيو S6: MP5 ڏيکاري ٿو تيز رفتار مقناطيسي قبضو ۽ ذرڙن جي ترتيب کي وينٽرل trachea جي مٿاڇري تي، اشارو ڪري ٿو ته ايم پيز کي نشانو بڻائي سگهجي ٿو trachea جي گهربل علائقن ڏانهن.جڏهن MF جي ترسيل کان پوءِ trachea سان گڏ وڌيڪ فاصلي سان ڳولهيو ويو، ڪجهه MFs ڪيرينا جي ويجهو مليا، جيڪي سڀني MFs کي گڏ ڪرڻ ۽ رکڻ لاءِ ناکافي مقناطيسي فيلڊ جي طاقت جي نشاندهي ڪن ٿا، ڇاڪاڻ ته اهي سيال انتظاميه دوران وڌ ۾ وڌ مقناطيسي فيلڊ جي طاقت واري علائقي ذريعي پهچائي رهيا هئا.عمل.جڏهن ته، پوسٽنيٽل ايم پي ڪنسنٽريشن تصوير واري علائقي جي چوڌاري وڌيڪ هئي، اهو مشورو ڏئي ٿو ته ڪيترائي ايم پي ايئر وي علائقن ۾ رهي جتي لاڳو ٿيل مقناطيسي فيلڊ جي طاقت تمام گهڻي هئي.
تصويرن (a) کان اڳ ۽ (b) ايم پي 5 جي ترسيل کان پوءِ تازو euthanized چوٿيءَ جي پيچري ۾ هڪ مقناطيس سان گڏ صرف تصويري علائقي جي مٿان رکيل آهي.ڏيکاريل علائقو ٻن ڪارٽيلگينس حلقن جي وچ ۾ واقع آهي.ايم پي پهچائڻ کان اڳ ايئر ويز ۾ ڪجهه سيال آهي.ڳاڙھو دٻو اشارو وڌائي ٿو جيڪو برعڪس وڌائي ٿو.اهي تصويرون S6 ۾ ڏيکاريل وڊيو مان ورتيون ويون آهن: MP5 ضمني وڊيو.
وييو ۾ مقناطيس کي trachea سان گڏ منتقل ڪرڻ جي نتيجي ۾ ايم پي زنجير جي زاويه ۾ ايئر وي جي مٿاڇري تي تبديلي آئي، جهڙوڪ ڪيپيلرن ۾ مشاهدو ڪيو ويو آهي (ڏسو تصوير 8 ۽ ضمني وڊيو S7: MP5).تنهن هوندي، اسان جي مطالعي ۾، ايم پيز کي زنده تنفس جي پٿرن جي مٿاڇري سان نه ڇڪي سگهجي ٿو، جيئن ڪيپيلريون ڪري سگهن ٿيون.ڪجھ ڪيسن ۾، ايم پي زنجير ڊگھي ٿي وڃي ٿي جيئن مقناطيس کاٻي ۽ ساڄي ھلندو آھي.دلچسپ ڳالهه اها آهي ته، اسان اهو پڻ ڏٺو آهي ته ذرڙي زنجير سيال جي سطح جي سطح جي کوٽائي کي تبديل ڪري ٿي جڏهن مقناطيس ڊگهي طور تي trachea سان منتقل ڪيو ويندو آهي، ۽ وڌايو ويندو آهي جڏهن مقناطيس سڌو سنئون مٿي تي منتقل ڪيو ويندو آهي ۽ ذرات جي زنجير کي عمودي پوزيشن ڏانهن ڦيرايو ويندو آهي (ڏسو. ضمني وڊيو S7).: MP5 تي 0:09، هيٺان ساڄي).خاصيت واري حرڪت جو نمونو تبديل ٿي ويو جڏهن مقناطيس کي دير سان trachea جي چوٽي تي منتقل ڪيو ويو (يعني، جانور جي کاٻي يا ساڄي طرف، بلڪه trachea جي ڊيگهه سان).ذرات اڃا تائين انهن جي حرڪت دوران واضح طور تي نظر اچي رهيا هئا، پر جڏهن مقناطيس کي trachea مان هٽايو ويو ته، ذرات جي تارن جا ٽوٽڪا ظاهر ٿيڻ لڳا (ڏسو ضمني وڊيو S8: MP5، شروع ٿيندڙ 0:08).هي مقناطيسي فيلڊ جي مشاهدي واري رويي سان متفق آهي جيڪو شيشي جي ڪيپيلري ۾ لاڳو ٿيل مقناطيسي فيلڊ جي عمل هيٺ.
نمونو تصويرون MP5 ڏيکاريندي هڪ زنده بيشمار چوهيءَ جي پيچري ۾.(a) مقناطيس استعمال ڪيو ويندو آهي تصويرن کي حاصل ڪرڻ لاءِ مٿي ۽ trachea جي کاٻي طرف، پوءِ (b) مقناطيس کي ساڄي طرف منتقل ڪرڻ کان پوءِ.ڳاڙھو دٻو اشارو وڌائي ٿو جيڪو برعڪس وڌائي ٿو.اهي تصويرون S7 جي ضمني وڊيو: MP5 ۾ ڏيکاريل وڊيو مان آهن.
جڏهن ٻن قطبن کي trachea جي مٿان ۽ هيٺ اتر-ڏکڻ رخ ۾ ملايو ويو (يعني، ڪشش؛ تصوير. 3b)، MP chords ڊگھا ظاهر ٿيا ۽ trachea جي پسمانده ڀت تي واقع هئا نه ڪي ڊورسل سطح تي. trachea (ڏسو ضميمو).وڊيو S9:MP5).بهرحال، هڪ سائيٽ تي ذرڙن جي تمام گهڻي مقدار (يعني trachea جي ڊورسل مٿاڇري) کي دوئي مقناطيس ڊيوائس استعمال ڪندي فلوئڊ ايڊمنسٽريشن کان پوءِ معلوم نه ڪيو ويو، جيڪو عام طور تي هڪ مقناطيس ڊوائيس سان ٿئي ٿو.پوءِ، جڏهن هڪ مقناطيس ٺهرايو ويو هو ته مخالف قطبن کي ڀڃڻ لاءِ (شڪل 3c)، ڏيک جي ميدان ۾ نظر ايندڙ ذرڙن جو تعداد پهچائڻ کان پوءِ نه وڌيو.ٻنهي مقناطيسي ترتيبن کي ترتيب ڏيڻ مشڪل آهي ڇاڪاڻ ته اعلي مقناطيسي فيلڊ جي طاقت جيڪا ترتيب سان مقناطيس کي ڪشش يا زور ڏئي ٿي.سيٽ اپ کي پوءِ ايئر ويز جي متوازي هڪ واحد مقناطيس ۾ تبديل ڪيو ويو پر 90 درجا زاويه تي ايئر ويز مان لنگهي ويو ته جيئن قوت جون لائينون tracheal وال کي آرٿوگوني طور تي پار ڪري وڃن (شڪل 3d)، هڪ رخ جو مقصد اهو طئي ڪرڻ جو ارادو ڪيو ويو ته ذرات جي جمع ٿيڻ جي امڪان کي. پاسي واري ڀت.مشاهدو ڪيو وڃي.جڏهن ته، هن ترتيب ۾، ڪو به سڃاڻپ نه هئي MF جمع تحريڪ يا مقناطيس تحريڪ.انهن سڀني نتيجن جي بنياد تي، هڪ واحد مقناطيس سان هڪ ترتيب ۽ 30-درجي واقفيت جين ڪيريئرز جي vivo مطالعي لاء چونڊيو ويو (تصوير 3a).
جڏهن جانور کي انساني طور تي قربان ٿيڻ کان پوءِ فوري طور تي ڪيترائي ڀيرا تصوير ڏني وئي هئي، ٽشو جي حرڪت جي مداخلت جي غير موجودگي جو مطلب اهو هو ته صاف، ننڍڙن ذرن جي لڪير کي واضح intercartilaginous ميدان ۾، مقناطيس جي ترجمي واري حرڪت جي مطابق 'جھولڻ' ۾ سمجهي سگهجي ٿو.واضح طور تي MP6 ذرات جي موجودگي ۽ حرڪت کي ڏسو.
LV-LacZ جو ٽائيٽل 1.8 x 108 IU/mL هو، ۽ 1:1 کي CombiMag MP (MP6) سان ملائڻ کان پوءِ، جانورن کي 50 µl tracheal dose 9 x 107 IU/ml LV گاڏي (يعني 4.5) سان لڳايو ويو. x 106 TU/rat).)).انهن مطالعي ۾، ليبر دوران مقناطيس کي منتقل ڪرڻ بدران، اسان مقناطيس کي هڪ پوزيشن ۾ طئي ڪيو ته ڇا LV ٽرانسڪشن بهتر ٿي سگهي ٿي (a) مقناطيسي فيلڊ جي غير موجودگي ۾ ویکٹر پهچائڻ جي مقابلي ۾، ۽ (b) جيڪڏهن هوائي رستو ٿي سگهي ٿي. متمرکز ٿيڻ.سيلز اپر تنفس جي رستي جي مقناطيسي ٽارگيٽ علائقن ۾ منتقل ٿي رهيا آهن.
مقناطيس جي موجودگي ۽ LV ویکٹر سان گڏ CombiMag جو استعمال جانورن جي صحت تي منفي اثر انداز نه ٿيو، جيئن اسان جي معياري LV ویکٹر ڊليوري پروٽوڪول ڪيو.tracheal علائقي جي سامهون واريون تصويرون جيڪي ميڪيڪل خرابي جي تابع آهن (ضمني شڪل 1) ڏيکاري ٿو ته LV-MP علاج ٿيل گروپ هڪ مقناطيس جي موجودگي ۾ منتقلي جي تمام گهڻي سطح هئي (Fig. 9a).صرف نيري LacZ اسٽيننگ جو هڪ ننڍڙو مقدار ڪنٽرول گروپ ۾ موجود هو (شڪل 9b).X-Gal-stained نارمل ٿيل علائقن جي مقدار کي ظاهر ڪيو ويو آهي ته LV-MP جي انتظامي مقناطيسي فيلڊ جي موجودگي جي نتيجي ۾ تقريبا 6-گنا بهتري (تصوير 9c).
جامع تصويرن جو مثال LV-MP (a) مقناطيسي فيلڊ جي موجودگي ۾ ۽ (b) مقناطيس جي غير موجودگي ۾ tracheal transduction ڏيکاريندي.(c) مقناطيس (*p = 0.029، t-test، n = 3 في گروپ، مطلب جي ± معياري غلطي) جي استعمال سان trachea ۾ LacZ transduction جي نارمل ٿيل علائقي ۾ شمارياتي لحاظ کان اهم سڌارو.
غير جانبدار تيز ڳاڙهي داغ وارا حصا (مثال ڏيکاريل آهي ضمني تصوير. 2 ۾) ظاهر ڪيو ويو آهي ته LacZ-stained سيل ساڳئي نموني ۽ ساڳئي هنڌ تي موجود هئا جيئن اڳ ۾ ٻڌايو ويو آهي.
ايئر وي جين ٿراپي ۾ اهم چئلينج دلچسپي جي علائقن ۾ ڪيريئر ذرڙن جي درست لوڪلائيزيشن ۽ موبائيل ڦڦڙن ۾ هوائي فلو ۽ فعال بلغم صاف ڪرڻ جي موجودگي ۾ اعليٰ سطح جي ٽرانسڪشن ڪارڪردگي جي حاصلات ۾ رهي ٿي.LV ڪيريئرز لاءِ جيڪي سسٽڪ فبروسس ۾ تنفس جي بيمارين جي علاج لاءِ ارادو رکيا ويا آهن، هلندڙ ايئر ويز ۾ ڪيريئر جي ذرڙن جي رهائش جو وقت وڌائڻ هڪ ناقابل مقصد مقصد آهي.جيئن اشارو ڪيو ويو آهي Castellani et al.، مقناطيسي شعبن جو استعمال ٽرانسپشن کي وڌائڻ لاء ٻين جين پهچائڻ جي طريقن جهڙوڪ اليڪٽرروپوريشن تي فائدا آهن ڇاڪاڻ ته اهو سادگي، معيشت، مقامي ترسيل، وڌندڙ ڪارڪردگي، ۽ ننڍو انڪيوبيشن وقت کي گڏ ڪري سگهي ٿو.۽ ممڪن طور تي گاڏي 10 جو گهٽ دوز.بهرحال، vivo ۾ مقناطيسي ذرات جي خارجي مقناطيسي قوتن جي اثر هيٺ ايئر ويز جي ذخيري ۽ رويي کي ڪڏهن به بيان نه ڪيو ويو آهي، ۽ حقيقت ۾ هن طريقي جي صلاحيت برقرار رهندڙ ايئر ويز ۾ جين اظهار جي سطح کي وڌائڻ لاء ويوو ۾ ظاهر نه ڪيو ويو آهي.
PCXI synchrotron تي اسان جا ان ويٽرو تجربا ڏيکاريا ويا ته اسان جا سمورا ذرڙا جن کي اسان آزمايو، ايم پي پولسٽريئر جي استثنا سان، اسان استعمال ڪيل اميجنگ سيٽ اپ ۾ نظر اچي رهيا هئا.مقناطيسي فيلڊ جي موجودگي ۾، مقناطيسي ميدان تار ٺاهيندا آهن، جن جي ڊيگهه ذرڙن جي قسم ۽ مقناطيسي فيلڊ جي طاقت سان لاڳاپيل آهي (يعني، مقناطيس جي قربت ۽ حرڪت).جيئن تصوير 10 ۾ ڏيکاريل آهي، اسان جن تارن جو مشاهدو ڪريون ٿا اهي ٺهيل آهن جيئن هر هڪ ذرو مقناطيسي ٿي وڃي ٿو ۽ پنهنجي مقامي مقناطيسي فيلڊ کي متحرڪ ڪري ٿو.اهي جدا جدا شعبا ٻين ساڳين ذرڙن کي گڏ ڪرڻ ۽ گروپ سٽرنگ موشن سان ڳنڍڻ جو سبب بڻجن ٿا، ڇاڪاڻ ته مقامي قوتن جي مقامي قوتن جي ڪشش ۽ ٻين ذرڙن جي رجعت سبب.
ڊراگرام ڏيکاريندي (a, b) ذرات جي زنجير کي اندر ٺاهيندي رطوبت سان ڀريل ڪيپيلري ۽ (c, d) هڪ هوا سان ڀريل پيچرو.نوٽ ڪريو ته ڪيپيلري ۽ trachea پيماني تي ٺهيل نه آهن.پينل (a) پڻ MF جي وضاحت تي مشتمل آهي جنهن ۾ Fe3O4 ذرڙا زنجيرن ۾ ترتيب ڏنل آهن.
جڏهن مقناطيس ڪيپيلري جي مٿان هليو ويو، ته ذرڙي جي تار جو زاويه MP3-5 لاءِ نازڪ حد تائين پهچي ويو جنهن ۾ Fe3O4 شامل آهي، جنهن کان پوءِ ذرڙي جي تار پنهنجي اصل پوزيشن ۾ نه رهي، پر سطح سان گڏ هڪ نئين پوزيشن ڏانهن منتقل ٿي وئي.مقناطيساهو اثر ان ڪري ٿئي ٿو ڇاڪاڻ ته شيشي جي ڪيپليري جي مٿاڇري ايتري هموار آهي ته هن حرڪت کي اجازت ڏئي ٿي.دلچسپ ڳالهه اها آهي ته، MP6 (CombiMag) هن طريقي سان عمل نه ڪيو، شايد ڇاڪاڻ ته ذرات ننڍا هئا، هڪ مختلف ڪوٽنگ يا سطح جي چارج هئي، يا ملڪيت جي ڪيريئر سيال انهن جي منتقل ڪرڻ جي صلاحيت کي متاثر ڪيو.CombiMag ذري جي تصوير ۾ برعڪس پڻ ڪمزور آهي، اهو مشورو ڏئي ٿو ته مائع ۽ ذرات ساڳيا کثافت هوندا ۽ تنهنڪري آساني سان هڪ ٻئي ڏانهن منتقل نه ٿي سگهي.ذرڙا به ڦاسي سگهن ٿا جيڪڏهن مقناطيس تمام تيزي سان هلي ٿو، اهو ظاهر ڪري ٿو ته مقناطيسي فيلڊ جي طاقت هميشه سيال ۾ ذرڙن جي وچ ۾ رگڙ تي قابو نه ٿي سگهي ٿي، اهو مشورو ڏئي ٿو ته مقناطيسي فيلڊ جي طاقت ۽ مقناطيسي ۽ ٽارگيٽ واري علائقي جي وچ ۾ فاصلو نه اچڻ گهرجي. تعجب.اهم.انهن نتيجن مان اهو پڻ ظاهر ٿئي ٿو ته جيتوڻيڪ مقناطيس ٽارگيٽ ايريا ذريعي وهندڙ ڪيترن ئي microparticles تي قبضو ڪري سگهن ٿا، اهو ممڪن ناهي ته مقناطيس تي ڀروسو ڪري سگهجي ٿو CombiMag ذرات کي trachea جي مٿاڇري سان منتقل ڪرڻ لاء.ان ڪري، اسان اهو نتيجو ڪيو ته vivo LV MF مطالعي ۾ جامد مقناطيسي شعبن کي استعمال ڪرڻ گهرجي جسماني طور تي هوائي وي وڻ جي مخصوص علائقن کي نشانو بڻائڻ لاء.
هڪ ڀيرو اهي ذرات جسم ۾ پهچايا ويندا آهن، انهن کي جسم جي پيچيده حرڪت واري ٽشو جي حوالي سان سڃاڻڻ ڏکيو هوندو آهي، پر انهن جي سڃاڻپ جي صلاحيت کي بهتر ڪيو ويو آهي مقناطيس کي افقي طور تي trachea جي مٿان منتقل ڪري ايم پي تارن کي ”وگل“ ڪرڻ لاءِ.جڏهن ته حقيقي وقت تصويري ممڪن آهي، اهو آسان آهي ته ذري جي حرڪت کي سمجهڻ کان پوء جانور کي انساني طور تي قتل ڪيو ويو آهي.ايم پي ڪنسنٽريشن عام طور تي هن جڳهه تي تمام گهڻو هوندو هو جڏهن مقناطيس کي تصويري علائقي جي مٿان پوزيشن ڏني وئي هئي، جيتوڻيڪ ڪجهه ذرات عام طور تي trachea جي هيٺان مليا هئا.ويٽرو مطالعي جي برعڪس، ذرڙن کي مقناطيس جي حرڪت سان trachea هيٺ نه ٿو ڇڪي سگهجي.اها ڳولها ان ڳالهه سان مطابقت رکي ٿي ته ڪيئن بلغم جيڪو trachea جي مٿاڇري کي ڍڪيندو آهي، عام طور تي سانس اندر اندر داخل ٿيندڙ ذرات کي پروسيس ڪري، انهن کي بلغم ۾ ڦاسائي ۽ پوءِ انهن کي ميوڪو-سيليري ڪليئرنس ميڪانزم ذريعي صاف ڪري.
اسان اهو تصور ڪيو ته ڪشش لاءِ trachea جي مٿان ۽ هيٺان مقناطيس استعمال ڪرڻ سان (Fig. 3b) وڌيڪ هڪجهڙائي واري مقناطيسي فيلڊ جي نتيجي ۾ ٿي سگهي ٿي، بلڪه هڪ مقناطيسي ميدان جيڪو هڪ نقطي تي تمام گهڻو مرڪوز آهي، ممڪن طور تي ذرڙن جي وڌيڪ يونيفارم ورڇ جي نتيجي ۾..بهرحال، اسان جي ابتدائي مطالعي کي هن نظريي جي حمايت ڪرڻ لاء واضح ثبوت نه مليو.ساڳيءَ طرح، مقناطيس جو هڪ جوڙو مقرر ڪرڻ سان (Fig. 3c) تصوير واري علائقي ۾ وڌيڪ ذرڙا آباد نه ٿيا.انهن ٻن نتيجن مان اهو ظاهر ٿئي ٿو ته ڊبل-مقناطيس سيٽ اپ ايم پي پوائنٽنگ جي مقامي ڪنٽرول کي خاص طور تي بهتر نه ٿو ڪري، ۽ انهي جي نتيجي ۾ مضبوط مقناطيسي قوتن کي ٽيون ڪرڻ ڏکيو آهي، انهي طريقي سان گهٽ عملي.ساڳيءَ طرح، مقناطيس کي مٿاهون ۽ trachea جي آر پار ڪرڻ (شڪل 3d) پڻ تصوير واري علائقي ۾ باقي ذرڙن جو تعداد نه وڌايو.انهن مان ڪجهه متبادل ترتيبون ڪامياب نه ٿي سگھن ٿيون ڇاڪاڻ ته اهي جمع ٿيڻ واري علائقي ۾ مقناطيسي فيلڊ جي قوت ۾ گهٽتائي جي نتيجي ۾.اهڙيءَ طرح، 30 درجا (Fig. 3a) تي واحد مقناطيس جي تشڪيل کي وييو ٽيسٽنگ طريقي ۾ سڀ کان آسان ۽ ڪارائتو سمجهيو ويندو آهي.
LV-MP مطالعي مان معلوم ٿئي ٿو ته جڏهن LV ویکٹرز CombiMag سان گڏ ڪيا ويا ۽ هڪ مقناطيسي فيلڊ جي موجودگي ۾ جسماني طور تي پريشان ٿيڻ کان پوء پهچايو ويو، ڪنٽرول جي مقابلي ۾ trachea ۾ ٽرانسپشن جي سطح خاص طور تي وڌي وئي.synchrotron اميجنگ مطالعي ۽ LacZ نتيجن جي بنياد تي، مقناطيسي فيلڊ LV کي trachea ۾ رکڻ جي قابل ٿي ۽ ویکٹر جي ذرڙن جو تعداد گھٽائي ٿو جيڪي فوري طور تي ڦڦڙن ۾ گھڙي ويا.اهڙن ھدفاتي سڌارن کي اعلي ڪارڪردگي جي اڳواڻي ڪري سگھي ٿو جڏهن ته پهچائي ٽائيٽرز کي گھٽائڻ، غير ھدف ٿيل ٽرانزيڪشن، سوزش ۽ مدافعتي ضمني اثرات، ۽ جين جي منتقلي جي خرچن کي گھٽائڻ.خاص طور تي، ٺاهيندڙ جي مطابق، CombiMag استعمال ڪري سگھجي ٿو ٻين جين جي منتقلي جي طريقن سان، ٻين وائرل ویکٹرز (جهڙوڪ AAV) ۽ نيوڪليڪ ايسڊز سميت.